流式细胞技术和流式细胞仪.ppt

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1、第十一章流式细胞技术与流式细胞仪本章内容提要概述第一节流式细胞仪的工作原理第二节流式细胞仪的分类与结构第三节流式细胞仪的主要性能指标第四节流式细胞仪应用的技术要求第五节FCM的维护及常见故障的排除第六节流式细胞仪的临床应用本章内容小结概述流式细胞仪的定义流式细胞术的定义生物学颗粒的内容流式细胞仪的发展史概述流式细胞仪的定义:流式细胞仪是以激光为光源，集流体力学技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概述流式细胞术的定义:应用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进

2、行快速的、多参数的定量分析和分选的技术称为流式细胞术。概述生物学颗粒包括大的免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细菌、霉菌、染色体、真核细胞、杂交细胞、聚集细胞等，所检测的生物颗粒的理化性质包括细胞大小、细胞形态、胞浆颗粒化程度、DNA含量、总蛋白质含量、细胞膜完整性和酶活性等。概述1934年：Moldavan1967年：VanDilla和LosAlamos1965年：Kamentsky1969年：Fulwyler利用Sweet80年代90年代概述1934年Moldavan使悬浮的血红细胞从一个毛细玻璃管中流过，每

3、个通过的细胞可被一个光电装置记录下来，这可谓流式细胞仪的最初模型。概述1965年Kamentsky用紫外吸收和可见光散射两个参数同时测量未染色的细胞，给出了细胞中核酸的含量和细胞大小，奠定了多参数流式细胞测量的基础。概述1967年VanDilla和LosAlamos采用了Crosland-Taylor设计的层流流动室和氩离子激光器开发出了液流束、照明光轴，检测系统三者互相垂直的流式细胞仪，成为目前各种流式细胞测量仪的基础。概述1969年Fulwyler利用Sweet的静电墨水喷射液滴偏转技术，建立了流式细胞分选术。Ehrlich和Wheel

4、ess利用飞点扫描技术和缝扫描技术使零分辨率的流式细胞仪变成了低分辨率的流式细胞仪。概述80年代以来，流式细胞仪的数据采集、存储、显示、分析日趋完善，随着样品制备方法的增多，新的荧光染料和细胞标记物的出现，流式细胞仪的应用范围逐渐扩大。概述进入90年代，标本制备仪和自动进样器的问世，以及适合临床应用的单克隆抗体的增加，使流式细胞仪不仅出现在大专院校和科研单位，它也逐渐进入医院的中心实验室和检验科。第一节流式细胞仪的工作原理第一节流式细胞仪的工作原理一、生物学颗粒分析原理二、细胞分选原理第一节流式细胞仪的工作原理1.样品的进入流动室：将悬浮分

5、散的单细胞悬液，经特异荧光染料染色后，放人样品管。在气体压力的作用下，悬浮在样品管中的单细胞悬液形成样品流垂直进入流式细胞仪的流动室，沿流动室的轴心向下流动。第一节流式细胞仪的工作原理2.鞘液的作用：流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕细胞悬液的鞘液流，鞘液和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为测量区。第一节流式细胞仪的工作原理3.信号的产生与接收：染色的细胞在测量区受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这些信号分别被光电倍增管和光电二极管接收，经过计算机储存、计算、分析这些数字

6、化信息，就可得细胞的大小和核酸含量等指标。第一节流式细胞仪的工作原理当某类细胞的特性与要分选的细胞相同时，流式细胞仪就会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷，带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的符号分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内。第二节流式细胞仪的分类和基本结构一、流式细胞仪的分类（一）流动室与液流驱动系统（二）激光光源与光束成形系统（三）光学系统（四）信号检测与分析（五）细胞分选器二、流式细胞仪的基本结构第二节流式细胞仪的分类和基本结构一、流式细胞仪的分类流式细胞仪根据功能不同可分为临床型和

7、科研型。临床型只有分析功能，没有分选功能，操作简便，易学易掌握。科研型既有分析功能又有分选功能，可快速将所感兴趣的细胞分选出来。第二节流式细胞仪的分类和基本结构一、流式细胞仪的分类流式细胞仪根据其结构不同又可分为一般流式细胞仪和狭缝扫描流式细胞仪。前者的光斑直径大于被检细胞体积，只能提供细胞内某种生物化学成分的参数。狭缝扫描流式细胞仪被检细胞直径大于激光光斑直径，可计算出细胞直径大小、核直径大小、核浆比例等一系列的形态学信息的定量资料。第二节流式细胞仪的分类与结构狭缝扫描流式细胞仪被检细胞直径大于激光光斑直径，细胞通过光束时各部分被依次扫描

8、。第二节流式细胞仪的分类和基本结构二、流式细胞仪的基本结构（一）流动室与液流驱动系统流动室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央开一个孔，供细胞单个流过，检测区在该孔的中心，流动室内充