顺铂与紫杉醇联合应用对小鼠宫颈癌组织中Bcl-2、Bax、Caspase-9表达的影响.pdf

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1、山东医药2015年第55卷第23期顺铂与紫杉醇联合应用对小鼠宫颈癌组织中Be]一2、Bax、Caspase一9表达的影响黄彤辉(南华大学附属南华医院，湖南衡阳421001)摘要：目的观察顺铂(DDP)与紫杉醇(TXL)联合应用对宫颈癌小鼠宫颈癌组织Bcl一2、Bax、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase．9)表达的影响。方法32只615小鼠均建立小鼠宫颈癌模型，后随机分为A组9只、B组9只、C组10只、D组10只。A组小鼠皮下注射生理盐水0．2mL，每6天1次。B组小鼠皮下注射DDP4mg／(kg·mL)，每6天1次。c组小鼠腹腔注射TXL5

2、0mg／(kg·mL)，每周1次。D组小鼠皮下注射DDP4mg／(kg·mL)，每6天1次；TXL50mg／(kg·mL)，每周1次；第1次注射时先注射TXL后注射DDP，其后两药序贯用药。采用免疫组化sP法检测各组Bcl-2、Bax、Caspase-9。结果A组宫颈癌组织Bel-2表达量为6300．43±458．34、Bax表达量为7244．22±363．72、Bax／Bcl-2为1．14±0．31、Caspase-9表达量为5144．22±363．71，B组分别为4146．56±202．50、6613．89±237．49、1．59±0

3、．22、6913．89±337．49，c组分另4为5361．20±367．80、6210．50±320．25、1．15±0．31、9310．50±220．25，D组分别为1950．80±103．31、9334．40±471．53、4．79±1．34、10334．40±351．53，A、B、C组分别与D组比较，P均<0．05。结论与单用DDP、TXL比较，DDP联合TXL化疗可明显降低Bel-2水平，增加Bax蛋白水平和激活Casp~e-9，从而达到促进宫颈癌细胞凋亡的作用。关键词：顺铂；紫杉醇；宫颈癌；白细胞介素2；半胱氨酸蛋白酶9doi

4、：10．3969／j．issn．1002—266X．2015．23．009中图分类号：R711文献标志码：A文章编号：1002-266X(2o15)23-0026~2联合化疗可显著提高单个化疗药物的抗肿瘤效窝皮下接种0．1mL(1X10。个宫颈癌U14细胞)，力，同时可明显减轻化疗药物的毒性反应。紫杉烷接种10d后，可扪及皮下结节状瘤体。当小鼠皮下类与铂类之间存在交互作用，其合并效应呈现出不结节状瘤体直径约6ram(100mm)目．无并发症即可同程度的相加。目前，顺铂(DDP)和紫杉醇(TXL)入选注药。小鼠随机分为A组9只、B组9只、C

5、组10联合化疗已成为治疗宫颈癌常用的化疗方案。小剂只、D组10只。A组小鼠皮下注射生理盐水0．2mL，量DDP和TXL联合化疗方案的抗癌作用与肿瘤细每6天1次。B组小鼠皮下注射DDP4mg／胞凋亡是否有关未见相关报道．。以往研究显示，(kg·mlJ)，每6天1次。C组小鼠腹腔注射TXL50DDP和TXL联合化疗对小鼠宫颈癌细胞有促凋亡mg／(kg·mL)，每周1次。D组小鼠皮下注射DDP4作用，但其相关机制鲜有报道。本研究观察了DDPmg／(kg·mIJ)，每6天1次；TXL50rag／(·mL)，每联合TXL化疗对小鼠宫颈癌细胞Bel一

6、2、Bax、半胱周1次；第1次注射时先注射TXL后注射DDP，其后两氨酸蛋白酶9(Caspase-9)表达的影响，进一步讨论药序贯用药。待各组中出现第1只小鼠死亡为治疗终DDP、TXL联合化疗对小鼠宫颈癌细胞促凋亡作用止时间点，处死全部实验用小鼠，切除完整肿瘤组织，的可能机制。用10％中性甲醛溶液浸泡固定，乙醇梯度脱水后石蜡1材料与方法包埋，常规切片(4m厚)。1．1细胞株及实验动物小鼠宫颈癌U14细胞1．3宫颈癌组织Be1．2、Bax、Caspase-9检测采用株。实验用615小鼠32只，雌性13只，雄性19只；免疫组化sP法。用PBS

7、液代替一抗作阴性空白对18～22g，4～6周；DDP每支10mg、TXL每支照。Be12、Bax及Caspase-9一抗工作浓度分别为3Omg；小鼠Bel-2、Bax单克隆抗体及兔Caspase-91：150、1：100、1：100。以PBS代替一抗作为空白对多克隆抗体。照。一抗孵育4℃过夜，镜下控制染色，Bcl-2、Bax1．2模型制备及顺铂、紫杉醇干预每只小鼠右腋及Caspase-9阳性反应均表现为定位于胞膜和胞质内棕黄色或棕褐色细小颗粒。每张免疫组化片随机基金项目：湖南省科技厅计划项目(2o13FJ6068)。选取10个高倍视野，使

8、用免疫组化图像分析软件测26山东医药2015年第55卷第23期其积分光密度值并取其平均值，以积分光密度值反的比值决定了细胞是否凋亡。Caspase-9是天门冬映Bcl-2、Bax、Caspas