顺铂抗体外肿瘤细胞的药物敏感性研究.pdf

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1、塞且堕丛銎年箍22鲞笙塑一,[gurna)_ofPra(；ficalMedical3_'echniques,Feb_ruary2015,Vo1．22,一No．2·135··基础研究·顺铂抗体外肿瘤细胞的药物敏感性研究广东省中山市人民医院肿瘤研究所(528403)方慧云陈敬国顺铂(DDP)是公认的具有广泛抗癌效应的有效化学治疗顺铂对人肺癌细胞集落形成的影响：肿瘤细胞培养组8药物之一，但其耐药的产生限制了其效应的发挥。顺铂是一例，细胞集落数为52．0+2．8；顺铂有药培养组8例，细胞集落数个高效、广谱的抗癌药。1978

2、年首先在美国批准肿瘤治疗临为26．1-+2．6，抑制率为49．93％。表明培养72h后，顺铂对人肺床应用，并迅速成为重要的癌症治疗药物，用于多种肿瘤的治癌细胞集落形成有减少的影响(P<0．05)。疗，如头颈肿瘤、肺癌、乳腺癌、消化系统恶性肿瘤、妇科恶性2．2顺铂注射液抗体外人宫颈癌细胞的药物敏感l生：培养72h肿瘤等。它是一种细胞毒药物，不仅能杀伤肿瘤细胞，抑制肿后经检测及计算得出结果。瘤细胞修复损伤，当它与放射合用，还具有放射的增敏作用。顺铂对人宫颈癌细胞集落形成的影响：肿瘤细胞培养组顺铂注射液抗体外肿瘤细胞的药

3、物敏感性如何呢?我们作了8例，细胞集落数为32．2±1．9；顺铂有药培养组8例，细胞集落相关研究，现报告如下。数为15．9+1．8，抑制率为50．78％。表明培养72h后，JIli．~Iil对1材料与方法人宫颈癌细胞集落形成有减少的影P~J(P<0．05)。1．1材料3讨论人肺癌细胞(GLC一82)、人宫颈癌细胞(Hela)由昆明医学顺铂是一种以二价铂与2个氯原子和2个氨分子结合的院附属一医院肿瘤研究所提供。四甲基偶氮唑盐(MTr)等重金属络合物，自1978年第1次由美国食品药品监督管理局(Simolmn公司)、顺

4、铂注射液(浙江海门制药厂)、培养液(FDA)批准用于治疗睾丸癌和膀胱癌以来，已经应用于许多RPMI1640(美国Sigma)、15％新生小牛血清(杭州四季青乡实体肿瘤的治疗，但肿瘤对顺铂耐药性的产生严重影响了其家畜配种站)、青霉素200U／mL、链霉素150p．g／mL等。疗效【1l。虽然目前已经研发出了第3代的铂类药物，但顺铂仍1．2仪器然是铂类药物中应用最广、最有效的抗肿瘤药物。WJ一3型CO，培养箱(日本Harasawa公司)、倒置显微镜JI1i．~11本身是一种中性的、正方形Pt(CN)配合物，含有2(日本

5、Olympusim公司)、Model450自动酶标检测仪(Bio—Rod个氯离子配体位于顺位，这种结构在血浆中及细胞外具有稳公司)、96孔细胞培养板(丹麦Nunclon公司)、XTM一420自动定性。当顺铂进入细胞内，由于细胞内高浓度的氯离子，会产控温仪(北京潮阳自动化仪表厂)。生一系列的效应，使顺位的氯离子自发地为水分子所替代，形1．3方法成具有亲水性的正电子化合物，并易于与许多细胞质基质相1．3．1分组：肿瘤细胞培养组：肿瘤细胞株培养；顺铂有药培结合，特别是内生的亲核物质，如谷胱甘肽、蛋氨酸、金属硫蛋养组：顺铂

6、与肿瘤细胞株一起培养。白等形成蛋白质、DNA、RNA等的加合物。水合的顺铂易于1．3．2体外培养细胞的检测：MTT法测肿瘤细胞存活率：吸与鸟嘌呤碱基上的N7上的N结合，也可与胞嘧啶及腺嘌呤去培养24h后的96孔板细胞培养上清液，每孑L分别加入结合，引起DNA链间或链内交联，形成将近65％的1，2一d100L待测样品及对照液。置37℃、体积分数为5％C0培(GpG)，25％的1，2-d(ApG)，5％～1O％的1，3一d(GpNpG)的养箱孵育48h，培养结束前4h每孑L加入二甲基砜100LLL，链内交联，还有很少一

7、部分形成链间交联和单功1111合物_3l。在微量震荡器上缓慢振荡1Omin。用酶标仪测定570nm处随着对顺铂作用机制研究的深入，人们发现：①只有少于l％吸光度(A)值，用(A)／A自xlO0％，计算每个样品细的细胞内顺铂会与核DNA结合【；②在无细胞核细胞中，II~I1胞增殖抑制率(IR％)。也产生明显的细胞毒效应。由此推测，顺铂的抗肿瘤效应可1．3．3平板克隆形成：以上培养液用磷酸盐缓冲液(PBS)清能是通过DNA损伤和线粒体的凋亡来共同实现的。洗细胞，吹干，甲醛固定，Gimesa染色，计算每孔细胞集落数本研究

8、发现肿瘤细胞在体外顺铂注射液有药培养后均出(50个细胞以者算一个集落)。现不同程度减少。说明顺铂注射液抗体外肿瘤细胞有一定的1．4统计学处理药物敏感性。采用￡检验和检验，以P<0．05为差异有统计学意义。参考文献2结果【I]GiacconeG．Clinicalperspectives2．1JI~-IiI注射液抗体外人肺癌细胞的药物敏感性：培养72hDrugs