苏丹红Ⅰ酶联免疫吸附检测方法的建立.pdf

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1、第28卷第6期食品与生物技术学报Vo1．28No．62009年11月JournalofFoodScienceandBiotechnologyNOV．2OO9文章编号：1673—1689(2009)06—079l—O4苏丹红I酶联免疫吸附检测方法的建立涂顺，裘雪梅，谢少霞，吴前辉，刘仁荣(江西科技师范学院生命科学学院，江西南昌330013)摘要：应用抗苏丹红I单克隆抗体12D8建立了间接竞争EIISA方法，用于检测辣椒粉中的苏丹红I，最低检出限为4．22ng／mI，检测范围为7．8～125ng／mI。用体积分数70／~／0甲醇水溶液

2、提取辣椒粉中的苏丹红I(8O～4000ng／g)．回收率为52．3～11O，变异系数为3．2～8．9。关键词：苏丹红I；酶联免疫吸附试验(EIISA)；检测；单克隆抗体中图分类号：TQ610．7文献标识码：AEnzymeLinkedImmunosorbentAssayfortheDetectionofSudanITUShun．QIUXue—mei，XIEShao—xia，WUQian—hui，IIURen—rong(LifeScienceInstitute，JiangxiScience＆TechnologyNormalUniver

3、sity．Nanchang330013，China)Abstract：AfastandreliableSudanIdeterminemethodwithEIISAandanti—SudanIMcAb12D8wasdevelopedinthisstudy．Itwasfoundthatthedeterminationlimitationwas4．22ng／mIandthelinearrangeoftheinhibitioncurvewas7．8—125ng／mL。respectively．Inthedetectionofthesamp

4、lesofmixedchillipowderwithSudanI(8O～4000ng／g)，extractedwithmethanol：water(70：30，v／v)，therecoveryrateofSudanIinthesamplesrangedfrom52．3to110，andthecoefficientsofvariationwas3．2to8．9％o．Keywords：SudanI：ElISA；detection；monoclona1antibody苏丹红I(SudanI)是一种人工合成的红色亲脂主要有液质联用法和高效

5、液相色谱法_8，尽管液性偶氮化合物。化学名称为1一苯基偶氮一2一萘酚。苏质联用和高效液相色谱法等仪器分析方法可以精丹红I常作为工业染料，被广泛用于如溶剂、油和蜡确地进行定量分析，但是由于其设备昂贵、操作复的增色以及鞋、地板等增光方面。许多实验证明：杂和对样品的纯度有较高的要求，导致检测成本苏丹红I及其代谢产物可与DNA生成加合物，是高、周期长，只能用于小批量样本抽检，无法满足食一种潜在的致癌剂。j，可引起肝脏、膀胱和脾脏等品安全检测中对大批量样本快速筛查的需要。而脏器的肿瘤_。因此，国际癌症研究机构(Inter—免疫化学方法由于具

6、有较高的灵敏度和特异性，对nationalAgencyforResearchonCancer，IARC)将样品的纯度要求不高，特别适合于大批量样本的检苏丹红I归为三类致癌物。另外，苏丹红I还具有测l】。国内韩丹_】门等用人工合成抗原免疫家兔制致敏性和遗传毒性[。。目前，苏丹红的检测方法备得到多克隆抗体并建立了间接竞争酶联免疫法收稿日期：2009—01一O6基金项目：江西科技师范学院博士科研启动基金、大学生科研创业项目。*通讯作者：刘荣(1969一)，男．江西南昌人，工学博士，教授，主要从事食品科学研究。Email：lilirenr

7、ong@hotmail．coin792食品与生物技术学报第28卷检测辣椒粉等中的苏丹红I号，测得检出限为0．12至45饱和度，作用3Omin，静置1h；10000g离t~g／L，ICs。值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度心30min，弃上清；沉淀溶于适量PBS中，对5O～值的50时所对应的待测物浓度)为0．74Ⅱg／L。100倍体积的PBS透析，4℃过夜，其间换液3次以作者成功地制备了较高亲和力和特异性的单克隆上。抗体，并在此基础上建立了间接竞争酶联免疫法，1．2．3检测抗原和单克隆抗体工作浓度的确定该方法可用于检测辣椒粉中的苏

8、丹红I号。将苏丹红I检测抗原(BSA—SudanI)用碳酸钠一碳酸氢钠缓冲液(pH9．6)分别稀释为1、2、4、6、8g／1材料与方法mL，4℃包被过夜，体积分数3脱脂牛奶封闭后用PBST洗涤4次用抗SudanI单克隆抗体12D81．1试剂与仪器苏