脱细胞半月板细胞外基质对半月板细胞的影响.pdf

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1、中国医药生物技术2015年6月第l0卷第3期ChinMedBiotechnol，June2015，Vo1．10，No．3·论著·DOI：10．3969／cmba．j．issn．1673—713X．2015．03．005脱细胞半月板细胞外基质对半月板细胞的影响郭维民，刘舒云，高钺，黄靖香，彭江，汪爱媛，王玉，卢世璧，郭全义【摘要】月板。前期我们实验室尝试通过纯物理的方法(湿目的探讨脱细胞半月板细胞外基质(dMECM)对传代半法粉碎、差速离心)制备新型的脱细胞半月板细胞月板细胞增殖、细胞活性以及细胞表型的影响。外基质

2、(decellularizedmeniscalextracellularmatrix，方法用CCK．8法检测dMECM对半月板细胞增殖的影dMECM)材料。实验结果证实，dMECM可以很响；将P代的内侧半月板纤维软骨细胞种植在dMECM好地保留半月板天然的细胞外基质成分，去除细胞修饰盖玻片上，以未修饰盖玻片为对照，体外培养7、14d核物质，仿生细胞生长的微环境L5J。为进一步探索后进行细胞活性检测，糖胺多糖、胶原分泌含量测定并用dMECM作为半月板组织工程支架材料的可行性，RT-PCR检测半月板细胞特异性基因mR

3、NA表达变化。本实验将考察传代半月板纤维软骨细胞在dMECM上的细胞活性、细胞表型、胶原含量以及特异性基结果CCK一8结果证实，与对照组比较，生长在dMECM因mRNA表达变化。修饰盖玻片上的P代兔半月板纤维软骨细胞具有更好的细胞增殖特性(P<0．05)；细胞死／i舌染色结果证实dMECM1材料与方法组可维持更好的细胞活性；糖胺多糖和胶原定量检测结果证1．1材料实dMECM组在第7、14天时，比对照组分泌更多的糖胺1．1．1主要试剂DMEM培养基、0．2％的II型多糖和胶原(P<0．05)。RT-PCR的检测结果

4、证实体外培养胶原酶、0．25％胰蛋白酶、死／活细胞染色试剂盒均7、14d时，dMECM组II型胶原mRNA表达显著上调购自美国Sigma公司；胎牛血清(FBS)购自美国(P<0．05)。Gibco公司；“三抗”(青霉素、链霉素、两性霉素)结论dMECM可以很好地促进半月板纤维软骨细胞的增和DEPC水购自上海碧云天公司生物技术研究殖、分化以及细胞活性的维持，可能是未来半月板组织工程所；CCK．8检测试剂盒购白日本Dojindo公司；领域非常有前景的支架材料之一。细胞GAG含量DMMB法检测试剂盒购自美国【关键词】细

5、胞外基质；关节半月板；组织工程；生GenMedScientificsInc公司；羟脯氨酸测试试剂盒物相容性材料；脱细胞；纤维软骨细胞购白南京建成科技公司；氯仿、异丙醇购自北京化WWW．cmbpnet．cn中国医药生物技术201510(3；．'218—222学试剂有限公司；TRIzol购自美国LifeTechnologies公司；ReverTraAce~qPCRRTMasterMix、SYBR半月板损伤是膝关节的常见损伤之一。因半月Green购自日本Toyobo公司；兔半月板细胞特异板内侧区域无神经、血管，若发生损

6、伤，往往难以性引物购白北京Parkson公司。自愈，倾向于永久性的创伤后退变l1J。半月板组织1．1．2仪器AllegraX22R型低温高速离心机工程技术给半月板损伤治疗带来了新的希望l2]。一和DU640型紫外分光光度计购自美国Beckman般而言，半月板组织工程主要由种子细胞、支架、公司；85．2型恒温磁力搅拌器购自江苏常州国华仪生物学或生物力学刺激三部分构成ljJ。在半月板支器公司；BB5060型CO2培养箱购自德国Heraeus架材料领域，采用脱细胞技术制备的细胞外基质公司；IX70型荧光显微镜购自日本O

7、lympus公(extracellularmatrix，ECM)生物材料，因其可以有效去除移植免疫源性物质，保留ECM成分及其生物活性物质而受到了广泛关注L4J。ECM支架材基金项目：国家自然科学基金(81472092)；国家高技术发展研究计划(863计划)(2012AA020502)料类似于天然半月板的细胞外基质成分，与其他传作者单位：100853北京，解放军总医院骨科研究所统材料相比，具有为种子细胞提供生长、分化的天通信作者：郭全义，Email：doetorguo@163CO1TI然微环境的优越性，有利于更好

8、地构建组织工程半收稿日期：2015-03．12中国医药生物技术2015年6月第10卷第3期ChinMedBiotechnol，June2015，Vo1．10，No．3司；EpochTake3酶标仪购自美国BioTek公司；本)，无菌PBS溶液清洗2次；将复合物用浓度RT-PCR仪购自美国AppliedBiosystems公司。为5×10mg／ml的二乙酸荧光素(FDA)室