唾液淀粉酶最适pH值的测定.pdf

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1、唾液淀粉酶最适pH值的测定口清华大学附属中学14班唐害谦【摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质，底物表1磷酸缓冲液配制表pH0．2mol／LNa2HPO4(m1)0．2mol／LNaH2PO4(m1)浓度相同时，酶的催化活性主要受温度、piq~t等因素影响。温度6．OO．6154．385一定时，酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。在不6．20．9254．0756．41．3253．675同pH值下。通过测定淀粉酶水解底物的程度，测定唾液淀粉酶6．61．8753．125的最适pH值。在不同pH条件下，淀粉被唾液淀粉酶水解，与碘6．82．45025．507

2、．O3．O5O1．950液反应呈现颜色反应，通过对颜色的观察和分光光度计测量产7．23．6001．400物吸光值的大小。可知底物的反应程度，从而可以判断出唾液淀(二)唾液的获取粉酶的最适pH。先漱口1～2次，然后含一大口水约lmin，期间做咀嚼运动，【关键词】唾液淀粉酶最适pH吸光值然后收集至杯子中。【中图分类号】G【文献标识码】A(三)淀粉用量的确定【文章编号】0450—9889(2015)02B一0117—02如表2，设置实验组与空白对照组。表2实验组和空白对照组设置表酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，细胞新用量(mL)陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在

3、酶的催化下进行的。酶实验组l23空白对照7．0pH缓冲液O．90．90．90．9催化化学反应的能力称为酶活性。酶的化学本质是蛋白质，它2．5g／L淀粉O．10．2O．3具有两性电解质的性质，在一定溶液中可以发生解离作用。酶唾液(稀释1O倍)O．1O．10．10．1H2O5．95．85．76无论在生活中还是在医学领域都具研究意义，酶的各种特性被混匀，37％水浴7．5min，然后向每管／Ji2滴碘液。广泛应用于各个领域。影响酶反应活力的因素很多，主要包括混匀，观察现象看出，0．3mL2．5g／L淀粉溶液颜色反应pH、温度、酶浓度、金属离子浓度、抑制剂等。最浅，选择该管做

4、下一步实验。酶在水溶液环境中的解离状态和行为，都受到H+的影响，(四)酶液稀释倍数的确定酶活性中心功能基团解离状态将直接影响到酶的活化以及酶与如下配制酶的稀释液。底物的亲和力，其会随着溶液pH的改变而改变。所以，溶液pH对表3a酶液稀释倍数酶催化反应的速度有明显的影响。在某-pH值时，酶活性达到最大，这一数值称为酶的最适pH。不同的酶的最适pH不相同。淀粉经唾液中的淀粉酶水解，生成糊精和麦芽糖，在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝通过实验得到的酶液稀释对照结果如下表：色复合物，其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力表3b酶液稀释对照表成

5、正比。用单位时间剩余淀粉量与碘反应产生的蓝色在660nm稀释倍数510l520253O空白7．0pH缓冲液O．90．90．9O．9O．9O．9O．9处的吸光度值来表示淀粉酶的活性。在温度、酶浓度相同的情2．5g／L淀粉(mL)O．3O．3O．30．3O．30．30．3况下，酶活力在最适pH的情况下达到最大。唾液0．10．1O．10．10．10．1H2O6666666一、实验过程混匀，37％水浴7．5min，然后向每管加2滴碘液。(一)不同pH缓冲液的配制混匀，观察到稀释5倍的1号管颜色最浅，为最适管。按下表配置不同pH的缓冲液。o(五)最适pH的确定二、实验结果实验

6、过程及其记录如下表：由以上实验过程可以得出，唾液淀粉酶的最适pH为6．4。O㈣5¨用5量(mL)55三、叫讨论pHl6．0l6．26．46．6l6．8l7．0l7．2唾液的pH一般为6．6～7．1，唾液淀粉酶的最适pH约为pH缓冲液l0．910．9O．90．910．9l0．9l0．92．5g／L淀粉l0．3l0．3O．30．310．3l0．3l0．36．8。在这次实验中产生误差的可能原因为：(1)制备酶时存某倍数唾液(5倍)10．1l0．1O．10．110．110．1l0．1在一些不足。直接漱口获得酶的方法对酶浓度的影响较大；每混匀，37~C水浴7．5rain，然后

7、向每管，l口2滴液H0l6l666l6I6I6个人因为个体差异，其唾液淀粉酶对酸碱度的适应程度不同。A660l0．33610．2570．1920．30910．35410．371l0．402(2)实验设置不理想。固定的缓冲液配置不够精确；水浴保混匀，用蒸馏水调零，测定A660。温时间和反应时间不一致。另外，实验中碘液的浓度也直接关以A660为纵坐标，pH为横坐标作图，得出如下结果：系到对实验结果的准确观察，若实验中配制的碘液浓度高，其颜色将实际反应的颜色遮蔽，对淀粉用量和淀粉稀释倍数的判定容易造成影响，使实验结果不能准确地观察得到。酶活性受pH的影响，在37℃时，