瓦勒变性坐骨神经段对大鼠BMSCs向SCs分化的影响.pdf

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1、·1946·中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2014,3o(11):1946.1953[文章编号]1000-4718(2014)11.1946.08瓦勒变性坐骨神经段对大鼠BMSCs向SCs分化的影响木赵富生,武庚,武杨,金秀东,张际绯,李月珍l牡丹江医学院,牡丹江医学院红旗医院,黑龙江牡丹江157011)[摘要]目的:通过观察瓦勒变性坐骨神经段对大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemeeHs,BMSCs)增殖、分泌功能以及向施万细胞(Sehwannc

2、ells,SCs)分化的影响,探讨其在BMSCs向SCs分化中的作用及可能的机制。方法:采用全骨髓贴壁法分离、培养SD大鼠BMSCs,并采用免疫荧光法鉴定。应用Transwell建立坐骨神经段与BMSCs双层培养体系,将实验分为瓦勒变性坐骨神经段与BMSCs联合培养组(A组)、正常坐骨神经段与BMSCs联合培养组(B组)和BMSCs单独培养组(c组)。倒置相差显微镜观察联合培养过程中BMSCs形态变化;免疫荧光染色检测联合培养第7天各组BMSCs表达S-100情况;联合培养第0⋯147、11、14天,利用细胞计数法绘制各组BMSC

3、s生长曲线,ELISA法检测各组培养液上清中神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)含量,实时荧光定量PCR检测各组BMSCs中S-100mRNA表达情况。结果:成功分离培养BMSCs,免疫荧光鉴定BMSCs呈CD29、CD44和CDg0表达阳性。联合培养第7天倒置相差显微镜观察可见,A组BMSCs胞体回缩,呈梭形,并带有突起,形态类似SCs;B、C组大部分BMSCs形态无明显变化。联合培养第7天免疫荧光染色示,A、B、C组BMSCsS-100阳性表达率分别为31.1%±2.9%、16.2%±1.7%和0.42%

4、±0.07%,A组阳性表达率明显增高(P<0.05)。各组BMSCs生长曲线均近似⋯S’形,从第4天开始,A组BMSCs增殖速度明显快于B、C组(P<0.05);ELISA法检测示,A组NGF含量呈时间依赖性增加,于联合培养第7天达高峰,随后呈下降趋势。B、C组NGF含量随共培养时间延长有所增加,但显著低于A组(P<0.05);实时荧光定量PCR检测示,联合培养第4、7、11、14天,A组S-100mRNA表达明显高于B、C组(P<0.05)。结论:瓦勒变性坐骨神经段能有效促进大鼠BMSCs增殖并诱导BMSCs向SCs样细胞分化,

5、联合培养过程中NGF可能参与BMSCs向SCs分化的调控。[关键词]瓦勒变性;坐骨神经;骨髓间充质干细胞;施万细胞;分化[中图分类号]R363.14[文献标志码]Adoi:10.3969/j.issn.1000.4718。2014.11.005EfectsofWallerdegenerativesciaticnervesegmentsondiferentiation0fBMSCSintoSCsinratSZHAOFu—sheng,WUGeng,WUYang,JINXiu—dong,ZHANGJi.fei,LIYue.zhen(。M

6、udanjiangMedicalCollege,HongqiHospitalAffiliatedtoMudanjiangMedicalCollege,Mudanjiang157011,China.E—mail:liyuezhennv@163.corn)[ABSTRACT]AIM:ToobservetheeffectsofWallerdegenerativesciaticnervesegmentsontheabilityofprolifer-ationandsecretioninratbonemarrowmesenchymalste

7、mcells(BMSCs)aswellasthedifferentiationofBMSCsintoSchwanncells(SOs)underCO.culturecondition.METHODS:BMSCswereisolatedfromSDratsandidentifiedbyimmu.nofluorescence.InTranswellco—culturesystem,thedegenerativeratsciaticnervesegmentsandBMSCswereCO—culturedintheTranswellins

8、ertsandwellplates,respectively.Theexperimentsweredividedinto3groups:groupA,degenerativesci·aticnervesegmentsCO-culturedwithB

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