邹平地区猪伪狂犬病PCR检测及流行病学调查-论文.pdf

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1、山东畜牧兽医2014年第35卷调查报告邹平地区猪伪狂犬病PCR检测及流行病学调查王剑曲百友马超韩耀东(山东省邹平县畜牧兽医局256200)刘通(山东省滨州市畜牧兽医局)中图分类号：S8文献标识码：A文章编号：1007．1733(2014)05．0068．叭邹平县位于山东省中部偏北，西北临黄河。近年1．3．2PCR扩增每份总体积为20u1．PCRMIX10ul，引物来，畜牧业飞速发展。目前存栏生猪40．76万头。随着存2ul，模板2ul，超纯水6ul。按扩增条件为：94~C变性3min，栏数发展，新生猪死亡

2、率，猪呼吸道疾病越发难以控进入循环。94~C60s一65~C60s一72~C60s，40个循环后制。选取山东省邹平县地区9家猪场，每家猪场抽取母72℃延~*5min。猪，后备母猪，仔猪各15份血清样品进行伪狂犬PCR诊断1．3．3电泳1％的琼脂糖TAE电泳缓冲液中电泳。检测。检测结果：母猪感染率33％，后备母猪感染率2结果18％，仔猪感染率24％，总体感染率25％。2．1样品电泳图伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病毒(PRV)~Jf起的一种传染见附图。病。能够引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒f猪除2．2各类猪

3、感染率外)、及脑脊髓炎为主要症状的一种传染病。目前世界上目的基因217bp。从左到右依次有40多个国家都有本病报道，据不完全统计，中国已有为DL2000DNAMARKER，标准阳20多个省、市流行过本病，中国许多省市猪场呈爆发流性样品，样品1～7。其中样品1，3，行趋势。种猪感染伪狂犬病，主要表现为繁殖障碍，新5，7为阳性样品。(见附表)。检测的生仔猪死亡率可达100％。随着规模化猪场饲养密度和规■9个场内仅有1个场没有出现阳性样模化程度的提高，猪的呼吸道病日趋严重，成年猪感染品。总体阳性率25％。附图P

4、CR检测结果伪狂犬病虽然不表现临床症状，但伪狂犬病病毒会引发附表各类猪感染数量及感染率(头、％)呼吸道病或造成免疫抑制，因而仍然是规模化猪场最严重的传染病之一，。此次调查采用PCR检测方法，对邹平县9家猪场405份血样进行提取扩增。l材料和方法3结论1．1样品猪伪狂犬病是当地猪场主要威胁之一。出现的气选择当地9个规模化猪场进行耳静脉采血，共取得喘，死胎等症状很可能与带伪狂犬病毒存在很大关系。405份血清样品。其中母猪、后备母猪、仔猪各135份。母猪阳性率>仔猪阳性率>后备母猪阳性率。带毒母猪作1．2主要试

5、剂及仪器为重要传染源之一，很多仔猪存在垂直传播或者出生后离心吸附柱法病毒DNA提取试剂盒购自世纪元亨。不久被感染。隐性感染带毒猪与健康猪共存，缺乏有效即用型PCR混合液PCRMIX购于北京佳兰生物。上游引的隔离检疫是造成猪伪狂犬病持续蔓延的原因之一。物：5'-CAGGAGGACGAGCTGGGGCT～3’，下游引物：参考文献5’~GTCCACGCCCCGCTTGAAGCT~3’。引物由生工生[1】杨睿，翟少钦，王孝友等．重庆地区猪伪狂犬野毒株感染的流行病物合成。染色剂使用GelRed染色。PCR仪使用晶格

6、科学仪学调查[J】．兽医科技，2013(1)：96．97．器T960。[2】刘中原，刘石，徐卫松等．利用技术对猪伪狂犬疫苗含毒量的评价1．3方法[J】．浙江农业科学，2013(4)：475—477．1．3．1提取模板DNA按试剂盒说明取血清100ul，加入消【3]吕爱军，谢三星．猪伪狂犬病的诊断与防治研究进展[J]．当代畜化液及蛋白酶K水浴1h。加入300ulDNA结合液lO000rpm牧，2ooo(5)：26—27．离,~30s。加入5o0ulDNA洗涤液lO000rpm洗涤两次。洗脱(收稿日期：201

7、44)2一l1)离心得模板DNA。68