邻苯二甲酸单丁酯致小鼠肝脏和肾脏组织的氧化损伤.pdf

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1、田科学酮究2014．V0I．31No．08亿亏白生物互程Ohemistry&BiOengineeringdoi：10．3969／j．issn．1672—5425．2014．08．005邻苯二甲酸单丁酯致小鼠肝脏和肾脏组织的氧化损伤刘志敏，熊棣，曹凤华。梅宇飞，吴卓，杨旭，袁均林(华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室，湖北武汉430079)摘要：为了探究邻苯二甲酸单丁酯(MBP)对小鼠肝脏和肾脏的氧化损伤．将42只BALB／c小鼠随机分为7组，每组6只·分别为25mg·kg一、50mg·kg～、100

2、mg·kg～、200mg·kg的4个MBP染毒组、1个100mg·kg的邻苯二甲酸二丁酯(DBP)染毒组、1个空白对照组、1个溶荆对照组。染毒期间对小鼠的体征进行观察；14d后取其肝脏和肾脏组织．制作小鼠肝脏和肾脏组织的切片，对肝脏和肾脏的组织学形态进行观察；制作组织匀浆液用于检测肝脏和肾脏组织细胞的ROS、GSH、MDA的含量，以了解MBP对肝脏和肾脏组织的氧化损伤作用。结果显示：各剂量组小鼠肝细胞和肾小管上皮细胞均出现不同程度的细胞核固缩、细胞水肿、空泡样变、脂肪滴增大融合等症状；ROS和MDA的含量与MBP的染毒剂量

3、呈正相关．GSH的含量与MBP的染毒剂量呈负相关；相同剂量的DBP与MBP染毒组相比，MBP染毒组的ROS和MDA含量较高、GSH含量较低。表明，MBP的暴露与小鼠肝脏和肾脏组织的氧化损伤存在直接联系。关键词：邻苯二甲酸单丁酯；小鼠；肝；肾；氧化损伤中图分类号：R994．6文献标识码：A文章编号：1672—5425(2O14)08—0018—06从20世纪3O年代至今，邻苯二甲酸酯(PAEs)主对人体健康的影响提供了重要的信息[n-13]。要作为增塑剂大量存在于日常生活中，主要作用是软作者在此对MBP引起的小鼠肝脏和肾脏组

4、织的化塑料和增强塑料的弹性。由于此类材料不是以共价氧化损伤进行研究，拟为全面评价PAEs对人体健康键与终产物结合，可不断释放至土壤、水和大气中，造的影响提供更丰富的信息，也为全面了解PAEs毒性成环境污染_1]。邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl提供依据。phthalate，DBP)是使用量最大、污染最严重的1实验PAEsL3j。检测尿液中PAEs的代i身物发现，DBP的人体内暴露水平最高L4]。由于PAEs在环境中普遍存1．1材料、试剂与仪器在，其一级代谢物邻苯二甲酸单丁酯(MBP)在一些环SPF级雄性BALB／c小鼠，购

5、于湖北省预防医学境中也被发现。研究表明，MBP生物活性更高、毒性科学院动物实验中心。更大，不仅对生殖、发育、体内激素、核受体、炎症和肥邻苯二甲酸单丁酯(纯度≥98．5)、DCFH—DA胖等方面都能产生影响，甚至还可以致死、致畸、致突荧光染料(纯度>99．9)，Sigma公司；硫代巴比妥酸变[5]，成为PAEs毒性研究的新热点[6。。(TBA)、5，5，_二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)，分析纯，近年来，国外科学家通过测定尿液中PAEs的代国药集团化学试剂有限公司谢物MBP的含量间接反映PAEs的内接触水平，并基5415R型低

6、温冷冻离心机，德国Eppendorf公司；于尿液样品的易得性和检测方法的成熟度，认为MBPMS1Minishaker型涡旋仪，德国IKA公司；FLx800是一种较为合适的反映PAEs暴露的生物标志物。对型荧光酶标仪，美国Bio—Tek仪器有限公司；DNM～尿液中MBP的研究为评价PAEs在人体的暴露量及9602型酶标分析仪，北京普朗新技术有限公司；JN一基金项目：国家自然科学基金资助项目(51l36002)收稿日期：2014—04—07作者简介：刘志敏(1991一)，女，河南新乡人，硕士研究生．研究方向：生物化学与分子毒理

7、学；通讯作者：袁均林，副教授，E—mailyuanjl@mail．ccnu．edu．cn。刘志敏等：邻苯二甲酸单丁酯致小鼠肝脏和肾脏组织的氧化损伤／2o14年第8期3200DT型超声处理器，宁波江南仪器厂。中，10000×g离心5min；取上清液100L于酶标板1．2动物分组和染毒中排列，用全波长酶标仪检测，分别在450nm、532nm对42只4周龄SPF级雄性BALB／c小鼠先进行和600nm波长下测定吸光值(以加PBS缓冲溶液的l周的实验室环境饲养，l周后随机分为7组，每组6空白组为对照)。按公式C一6．45(0Ds2

8、一OD面o)一只：空白对照组，溶剂对照组，25mg·kgMBP染毒0．56OD。计算MDA的含量。组，50mg·kgMBP染毒组，100mg·kgMBP染1．9统计分析毒组，200mg·kgMBP染毒组，100mg·kgDBP数据采用Origin6．1统计软件进行检验处理，比染毒组。MBP、DBP均用金