芦丁对HepG2肝癌细胞AMPK蛋白信号通路的激活作用.pdf

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· 18 0 · Jou m al of M ed ical S cience Y an bian U niversity Sep.20 13 V o 1.36 N o .3 salidroside against acetam inophen—induced toxicity in m iceEJ2 .B iol Pharm B u ll,2008 ,31(8):1523.1529 .囹 芦 丁对 H epG 2 肝 癌 细胞 A M P K 蛋 白信 号通 路 的激 活 作 用 元海丹 ,李海燕 ,王瑜玲 ,朴光春 (1 .延 边 大 学 药 学 院 生 药 学教 研 部 ,吉 林 延 吉 133 00 2 ;2 .牡 丹 江 医 学 院红 旗 医 院 ,黑龙 江 牡 丹 江 157 01 1) [摘要] [目的] 探讨芦丁在 H epG 2 细胞 中是 否影响 A M PK 蛋 白信 号通路 .[方法] 采用 M T S 法测定 细 胞毒性 ;采 用 W estern blot 方法检测 AM PK 蛋 白的表达情况 .[结果] 芦丁在 0-- 80 “m ol/L 浓度范 围内, 在 24 h 内对 H epG 2 肝癌 细胞 没有 毒性;芦丁呈浓度和 时问依赖性地增高 AM PK 磷酸化.[结论] 芦丁对 H e pG 2 肝 癌 细 胞 A M P K 蛋 白信 号 通 路 有 激 活 怍 用 . [关键词] H epG 2 细胞 ;芦丁;A M PK [ 中图分类号] R 285.5 [文献标 志码] A [文章编号] 1000—1824 (2013 )03—0180—02 E ffe c ts o f r u tin 0 n a c tiv a tio n 0 f A M P K sig n a l p a th in H ep G 2 c ells Y U A N H a i—d a n ,L I H a i—y an 。W A N G Y u —lin g ,P IA O G u an g —ch u n (1.D epartm en t D『 P harm acogn osy ,Yan b Jan U niversity College of P harm acy ,Yanji 133002 ,J ilin ,Ch ina ;2.H ongq H osp ita l of M udanjian g M edical College ,M udano iang 157011 ,H eilongjiang ,China ) A B S T R A C T :0 B J E C T I V E T 0 s tu d y th e e ffe c ts o f ru tb t o n a ctiv a tio n o f A M P K sig n a l p a th in H e p G 2 h u m an h e p a to m a ce lls . M E T H O D S T h e to x ic ity o f tu rin fo r H e p G 2 ce lls w a s d e te rm in e d b y M T S , a n d th e e x p re s sio n o f A M P K p ro te in w a s d e te r m in e d b y W e s te rn b lo t .R E S U L T S R u t in in c o n ce n tra tio n ra n g e o f 0 to 80 >m o l/L h ad no any cyto tox icity for H epG 2 cells ,and ru tin enh an ced A M P K ph osph ory lati0n in dose— a n d tim e —d e p e n d e n t m a n n e r s .∞ 』、rC L j o Jlv R u tin c an in c re a se th e a c tiv a tio n o f A M P K sig n a l p a th in H e p G 2 h u m a n h e p a to m a c e lls . K ey w o rd s :H e p G 2 c e lls ;R u tin ;A M P K 单 磷酸 腺苷 活 化 蛋 白激 酶 (adenosine 5 .m on o— p hosp hate—activated pro tein k in ase ,A M P K )是 调 控 能 量稳 态 的重要 激 酶 ,也 是参 与许 多 细 胞 信 号 传 导 通 路 的关键 蛋 白 .作 为 细胞 的能 量 感受 器 ,A M P K 通 过 感 知 细 胞 内 单 磷 酸 腺 苷 ( adeno sine 5 『_ m onophosphate,AM P ) :A T P 比值 的变 化来 调 控 线 粒 体 的功 能 ,从 而 维 持 能 量 稳 态 .当 A M P :A T P 的 比值 升高 时 ,AM PK 被 激 活 ,增 强 线 粒 体 的 生 物合 成 ,并 通过 磷酸 化多 个 代 谢 酶 的方 式 抑 制 对 细 胞 生 长和增 殖极 其 重要 的脂肪 酸合 成 、类 异戊 二烯 合成 、 三酰 甘油及 磷脂 合成 、糖 原合 成等 .这些 代谢 酶包 括 乙酰辅 酶 A 羧 化酶 (acetyl—C oA carbox ylase ,A C C ) 、 [基金项 目] 吉林 省 中医药 管理 局项 目,项 目编 号:2012. 1 5 6 . [收稿 日期] 2013—07—15 [作者简介] 元海丹(1975一 ),女 (朝鲜族),讲 师,研 究方 向 为药物作用机 制. [通信作者] 朴光春 ,E m ail:gcpiao@ ybu.edu.cn. H M G —C oA 还原 酶 (H M G —C oA reductase ,H M G C R ) 、 糖 原磷 酸 酰 基 转 移 酶 、糖 原 合 成 酶及 R N A 聚 合 酶 I 转 录 因子 等【划 .芦 丁 的别 名 为芸 香 苷 、维 生 素 P 、 芸 香 叶苷 及 络通等 ,是 黄酮醇 类化 合物 ,广泛 存 在于 芸香 叶 、枣 、杏 、橙 皮 、番 茄 及 荞 麦 花 等 植 物 中.研 究 结果 表 明 ,芦 丁具 有 抗 炎 、抗 病 毒 、抗 辐 射 及 抗 自由 基 等 多 种 药 理 作 用 .本 实 验 采 用 M T S 及 W estern blot 方 法 观 察 了芦 丁 在 H epG 2 肝 癌 细 胞 AM PK 蛋 白信 号通 路 的影响 . 1 材料 与 方法 1.1 材 料 人 H epG2 肝癌 细胞 购 自美 国培养 物 保 存 中心(A T CC ,77400 ,U SA ),D M E M 培养基和胎牛 血 清 购 于 G IBCO 公 司 ,M T S 试 剂 购 于 PR 0M E GA 公 司 ,A M P K ,p-A M P K ,A C C ,P —A C C ,J3一actin 一 抗 购 于 C ell Sig nalin g T ech nology (U SA )公 司 ,抗兔 二 抗 购 于 San ta C ruz 公 司 . 11.2 方法 1.2.1 细 胞 培 养 将 H epG 2 细胞 置 于 D M E M 培 养基中,其 中有含 10 %(质量分 数)胎 牛血清 ,100
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