桃不同发育时期叶片总RNA提取方法的比较.pdf

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1、河南农业科学，2014，43(3)：116—120JournalofHenanAgriculturalSciences桃不同发育时期叶片总RNA提取方法的比较王其海，王裔娜，刘晓华，吴文江，丁宁，牛洪斌。，王林忠，吴国良(1．河南农业大学同艺学院，河南郑州450002；2．河南农业大学食品科技学院，河南郑州4500023．河南农业大学国家小麦程技术研究中心，河南郑州450002)摘要：为了从桃叶片中提取到高质量的RNA，以进行反转录、RT—PCR等后续分子生物学试验，选取了改良硼砂一CTAB法、改良CTAB法、改良SDS一苯酚法、试剂盒法、Trizol法，以及在试

2、验中探索的改良Trizol法I和改良Trizol法Ⅱ对桃不同发育时期的叶片总RNA进行提取，测定RNA样品的()D值，结合琼脂糖凝胶电泳检测总RNA样品的质量。结果表明，这些方法虽然都能获得桃叶片总RNA，但是或存在不同程度的DNA残留，或有蛋白、多糖等杂质污染，或降解严重；而改良的Trizol法提取总RNA的完整性和纯度较好；针对生长期和衰老期叶片的不同生理特性可分别采用改良Trizol法I和改良Trizol法Ⅱ。提取的总RNA反转录后，通过RT—PCR检测，条带明亮清晰，与预期目的基因片段大小一致，说明这2种方法提取的总RNA能用于后期的分子生物学试验。关键词

3、：桃叶片；RNA提取；Trizol法；改良CTAB法；改良SDS一苯酚法中图分类号：S662．1文献标志码：A文章编号：1004—3268(2014)03—0l16—05ComparativeAnalysisofTotalRNAExtractionMethodsforLeavesofPeachatDifferentDevelopmentStagesWANGQi—hal，WANGYi—na，IIUXiaohua，WUWen—jiang，DINGNing，NIUHong—bin，WANGLinzhong，WUGuo—liang(1．CollegeofHorticult

4、ure，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；2．CollegeofFoodScienceandTechnology，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；3．National(．；enterofEngineeringandTechnologicalResearchforWheat，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)Abstract：Thetota1RNAofpeachleav

5、esatdifferentdevelopmentstageswasextractedbytheim—provedborax—CTABmethod，improvedCTABmethod，improvedSDS—phenolmethod，kitmethod，Trizolmethod，andtheimprovedTrizolIandTrizolIImethod，thenthepurityandconcentrationofthetotalRNAsamplewasdetermined．TheresultsshowedthattheimprovedTrizolmethods

6、werebetter；fortheothermethods，thereweredifferentdegreesofDNAresidues，orpollution，ordegradation；improvedTrizolIandTrizolIImethodwerebetterfortheextractionoftotalRNAfrompeachleavesatvegetativestageandagingstage，respectively，andthetotalRNAextractedbytheimprovedTrizolmethodsmettheneedsoft

7、hefollow—upmolecularbiologicalstudy．Keywords：peachleaves；RNAextraction；Trizolmethod；improvedCTABmethod；improvedSDS—phenolmethod收稿日期：2013—10—18基金项目：国家自然科学基金项目(31171943)；河南省重大科技攻关项目(92l0ll10600)作者简介：王其海(1987一)，女，河南安阳人，在读硕士研究生，研究方向：果树分子生物学。E—mail：wqhthankyou@163．corn*通讯作者：吴困良(1958一)，男，山西

8、万荣人，教