毕业论文-抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定.docx

毕业论文-抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定.docx

ID:55934285

大小:817.56 KB

页数:37页

时间:2020-06-15

毕业论文-抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定.docx_第1页
毕业论文-抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定.docx_第2页
毕业论文-抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定.docx_第3页
毕业论文-抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定.docx_第4页
毕业论文-抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定.docx_第5页
资源描述:

《毕业论文-抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定.docx》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库

1、北京林业大学本科毕业论文抗植物毒素Pro.R单域抗体的五聚体构建、表达及生物活性鉴定摘要目的:建立单域抗体多聚化的技术平台,提高其与抗原的亲和力,以期实现单域抗体对毒素的高灵敏检测。方法和结果:从质粒pCANTAB5ES1中PCR扩增出特异识别植物毒素Pro.R的单域抗体S1的基因,亚克隆到五聚体载体pVT2中,构建重组表达质粒pVT2S1,再转化到E.coliTG1中。经westernblot鉴定了其正确表达,IPTG大量诱导后通过Ni-his亲和层析纯化,300mM咪唑溶液冼脱蛋白,获得了高表达的可溶性目的蛋白——pVT2S1。S

2、DS—PAGE分析显示表达的蛋白区带分子量约22kDa左右,与预期相符。ELISA结果表明,纯化的pVT2S1蛋白可特异性识别抗原Pro.R。由于pVT2载体上为5×his标签,与常用表达载体上6×his标签检测系统不同,为了统一单体VHH和五聚体VHH的检测标准,又进行了载体的改造,分别构建了pVT2S1(6×his)、空载体pVT2(6×his)和pETS1(单域抗体,N端为6×his标签),这些都为进一步研究VHH抗体的生物活性以及实际应用,如抗原的检测等奠定了较好的基础。结论:成功建立单域抗体多聚化的技术平台,实现了载体的统一

3、检测标准,为高灵敏度检测毒素Pro.R奠定基础。关键词:Pro.R,单域抗体,五聚体载体37北京林业大学本科毕业论文ConstructionofpentamerizedsingledomainantibodyagainsttoxinPro.RandidentificationofitsbindingactivityAbstractObjective:SettingupaplatformforscreeningVHHantibody(variabledomainofheavychainofheavychainantibody),impr

4、ovingtheaffinityofVHH,anddetectionthetoxininahighsensitivity.Methodsandresults:ThegeneofVHHS1thatspecificallyrecognizesplanttoxinPro.RwasamplifiedbyPCRfromplasmidpCANTAB5ES1.TheamplifiedfragmentswereclonedintopentamerizationvectorpVT2,andtherecombinantplasmidpVT2S1wastr

5、ansformedintoE.coliTG1.Afteridentificationofitsexpressionbywesternblot,TG1/pVT2S1wasinducedwithIPTG.ThetargetproteinexpressedinE.coliwaspurifiedbyNi2+Affinitychromatography(300mMimidizoneelution).SoweobtainedsolubleexpressiontargetproteinpVT2S1athighlevel.Theactivityofp

6、urifiedtargetproteinpVT2S1wasidentifiedbyELISA.Thereisa5×histagonvectorpVT2,whileonnormalvectorsthereisa6×histag.Toconformthetestingstandardof37北京林业大学本科毕业论文pentavalentVHHandmonovalentVHH,wereconstructedvectors:pVT2S1(6×his)、freevectorpVT(26×his)37北京林业大学本科毕业论文andpETS1(m

7、onomerVHHwitha6×histagonNterminal).AlloftheaboveworkisintendedasabasisforfurtherstudyandapplicationofVHH,suchastestingofantigen.Conclusion:WehavesuccessfullysetuptheplatformforscreeningVHHantibody,standardizedthedetectiontagofpentamerandmonomer,andestablishedthefoundati

8、onoftoxinhighsensitivitydetection.Keywords:Pro.R,VHH,pentamer37北京林业大学本科毕业论文目录1前言………………………………………………………………………………

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。