紫云英AD-cDNA文库的构建及与豆血红蛋白Lb相互作用靶蛋白的筛选

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1、攀,,,、、李硕士学位论文'紫云英·文库的构建及与豆血红蛋白相互作用靶蛋白的筛选。万研究生刘燕导师李友国教授专业微生物学研究方向生物固氮中国武汉二一年六月,分类号华中农业大学硕士学位论文紫云英汕一文库的构建及`器。黔默鼎黔淤黔叭研究生刘燕指导教师李友国教授指导小组李友国教授研究方向生物固氮专业微生物学获得学位时间年月获得学位名称理学硕士华中农业大学生命科学与技术学院二一年六月、,、华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学是位否保论文密作岛如需保密,解密时间义口了弓年若月汐日了独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果尽我所知,除了文中特别加以标注

2、和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明,并表示了谢意研究生斜`甸起时呼河·年`”尸日学位论文使用授权书本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定,即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本学校有权保存提交论文的印刷版和电子版,并提供目录检索和阅览服务。可以采用影印、缩印或扫描等复制一手段保存、汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容,间

3、时本人保留在其他媒体发表论文的权力。注保密学位论文即涉及技术秘密、商业秘密或中请专利等潜在需要提交保密的论文在解密后适用于本授权书灿鑫·考纠习签名。期州。年月二签名。期汤夕年石月刃。之紫云英文库的构建及与豆血红蛋白相互作用靶蛋白的筛选目录摘要……,…………缩略语表……前言……,……生物固氮概况……,……根瘤菌一豆科植物共生体系的作用机理及研究进展……根瘤菌中与结瘤固氮相关的基因……,……`……基因……基因……其它基因及基因间的相互作用……豆科植物中与结瘤固氮相关的基因……,……参与结瘤因子信号传导途径的基因……其它结瘤素基因……酵母双杂交系统……、…酵母双杂交的原理……,……,……,……

4、,,…,酵母双杂交的特点……紫云英一华癸中漫生根瘤菌共生固氮体系研究进展……研究目的和意义……,……材料与方法……,,……实验材料……所用菌株和质粒……培养基……,……常用缓冲液及其它……抗生素……,……,……,…方法……`……紫云英盆栽……,……紫云英总的抽提……一文库的构建……,……二,……合成第一链……一合成。第二链……,……双链的纯化……,……了华中农业大学届硕士学位论文酵母感受态的制备……将和一转化感受态细胞……在八平板上筛选库转化子……,……收集库转化子…,···············……文库的检测……诱饵质粒的构建及检测……目标基因的克隆及载体构建……诱饵载体自激活活性及

5、毒性的检测……,……滤纸平板影印……,……紫云英一文库的筛选……阳性克隆的分析……,···,····……菌落检测阳性克隆插入片段大小……阳性克隆酵母质粒的抽提……结果与分析……紫云英总和的质量……紫云英一文库库容量的鉴定……,……诱饵载体一刀口的构建……犯与相互作用的阳性克隆筛选及鉴定……阳性克隆的验证和分析……总结与讨论……总结……讨论……文库质量的影响因素……诱饵基因的选择·······································……关于和靶蛋白互作的可能机制及其在共生固氮中的功能……进一步研究设想……,····……参考文献……致谢……论文发表情况……,……附录…

6、…紫云英一文库的构建及与豆血红蛋白相互作用靶蛋白的筛选摘要紫云英一华癸中慢生根瘤菌共生固氮体系是我国具有长期研究历史,特色鲜明的一种共生固氮资源。为了更深入地研究这一共生固氮体系,阐明其生物固氮作用的分子机理,本研究利用酵母双杂交系统构建了高质量的华癸中慢生根瘤菌侵染紫云英后的根部组织文库,同时选取豆血红蛋白作为诱饵构建载体筛选文库。选取接种了华癸中慢生根瘤菌的豆科植物紫云英不同时期—、、、、、、、、、、、、、、、和个时间点收获根部组织,分别将以前和以后的根部组织按比例混合均匀。抽提,经过一和一后得到双链。对双链进行纯化和浓缩后,将其与线性化的一。质粒共转化酵母的,在酵母体内插入片断整合

7、到之后,在酵母体内与融合表达。待转化子长出后,洗脱转化子到液体培养基中,分别涂四缺平板验证,结果无污染也无野生型酵母生长后,混匀液体、分装后一保存。以此方法构建了两个不同时间段的酵母一文库。经检测库容量均达到此一,插入片段大小左右,且无污染。高质量的文库为实验室的下一步研究奠定了基础。克隆紫云英豆血红蛋白基因刀。构建诱饵载体一刀,确定没有有自激活活性和毒性后,利用酵母的有性生殖筛选紫云英一文库。运用酵母双杂交技术,筛选到多个与诱饵蛋