血细胞等临时标本的制备观察、计数及血型的检测.doc

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1、DNA指纹图谱实验上课地点：生化楼417上课时间：选课时任课教师：薛闯办公地点：生化楼215电话：84706308课程要求：预习实验内容，掌握实验FI的及原理、仪器和试剂、实验步骤；手写完成预习报告（实验名称、实验H的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤），课堂检查预习报告情况。自带U盘和尺子。实验注意事项：1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐；2、实验废物按实验室管理老师要求收集；3、实验结束后，经老师检查后方可离开。实验纪律：1、按吋上课2、穿实验服（白大衣）3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗4、手机静音实验成绩：20分40分40分预习报告：实验操

2、作：报告内容：结果和讨论DNA指纹图谱实验（指导教师：薛闯）一.实验目的1.掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2.掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度。3.掌握对DNA指纹数据进行基本统计分析方法。二・DNA指纹图谱实验原理1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的人源小卫星DNA用作基因探针，同人体核DNA的酶切片段杂交，获得了由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹，这种图纹极少有两个人完全相同，故称为nDNA指纹”，意思是它同人的指纹一•样是每个人所特有的。DNA指纹

3、的图像在X光胶片屮呈一系列条纹，很像商品上的条形码。由于DNA指纹图谱具有高度的变异性和稳定的遗传性，且仍按简单的孟德尔方式遗传，成为H前最具吸引力的遗传标记。DNA指纹具有下述特点：1.高度的特异性：研究表明，两个随机个体具有相同DNA图形的概率仅3xlO-n；如果同吋用两种探针进行比较，两个个体完全相同的概率小于5x10“9。全世界人口约50亿，即5xl09。因此，除非是同卵双生子女，否则几乎不可能有两个人的DNA指纹的图形完全相同。2.稳定的遗传性：DNA是人的遗传物质，其特征是由父母遗传的。分析发现，DNA指纹图谱屮儿乎每一条带纹都能在其双亲之一的图谱屮找

4、到，这种带纹符合经典的孟德尔遗传规律，即双方的特征平均传递50%给子代。3.体细胞稳定性：即同一个人的不同组织如血液、肌肉、毛发、精液等产生的DNA指纹图形完全一致。DNA指纹图谱法的基本操作:从生物样品屮提取DNA（DNA一般都有部分的降解）,可运用PCR技术扩增出高可变位点（如VNTR系统，串联重复的小卫星DNA等）或者完整的基因组DNA,然后将扩增出的DNA酶切成DNA片断，经琼脂糖凝胶电泳，按分子量大小分离后，转移至尼龙滤膜上，然后将已标记的小卫星DNA探针与膜上具有互补碱基序列的DNA片段杂交，用放射口显影便可获得DNA指纹图谱。待测DNA样品的制备酶切

5、待测DNA样品的电泳分离的琼BRWSW!伽〃"他血UMtllDNA—…标准分fJftDNA/^//带有DNA片段的凝胶Southern卬谨航克阳制备探针.Southern杂交杂交结果的检测DNA指纹图谱法的基本操作示意图琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳是分离，鉴定和纯化DNA片段的常规方法。利用低浓度的荧光嵌入染料■混化乙锭进行染色，可确定DNA在凝胶屮的位置。如有必要，还可以从凝胶屮回收DNA条带，用于各种克隆操作。琼脂糖凝胶的分辨能力要比聚内烯酰胺凝胶低，但其分离范围较广。用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为200bp至近50kbp的DNAo长度lOOkb或更大

6、的DNA,可以通过电场方向呈周期性变化的脉冲电场凝胶电泳进行分离。在基因工程的常规操作屮，琼脂糖凝胶电泳应用最为广泛。它通常采用水平电泳装置，在强度和方向恒定的电场下进行电泳。DNA分子在凝胶缓冲液(一般为碱性)屮带负电荷，在电场屮由负极向正极迁移。DNA分子迁移的速率受分子大小，构象。屯场强度和方向，碱基组成，温度和嵌入染料等因素的影响。DNA指纹数据处理：1.DNA指纹图谱的共有带率sharing,简称BS)BS=2Nab/(Na+Nb)式屮：Na指个体A的条带数，Nb为个体B的条带数，Nab指个体A和个体B共有的条带数。2.平均等位基因频率(q)及最低平均杂

7、合率(Ht)q=I-(1-BS)12,Ht=l-q式屮BS为共有带率。3.两个个体具有完全相同的DNA指纹图谱的概率(P)两个无关个体具有完全相同的DNA指纹图谱的概率为：Pi=(1-2BS+2BS2)n/HS；两个同胞个体具有完全相同的DNA指纹图谱的概率为：P2=[l-0.5q(1-q)2(4-q)]n/BS式屮：n为个体的平均条带数，q为平均等位基因频率。三・实验材料和试剂1.DNA样品：犯罪现场CSDNA样品、嫌疑犯SIDNA样品、嫌疑犯S2DNA样品、嫌疑犯S3DNA样品2.化学试剂和溶液(1).TAE(50x)Tris242g冰醋酸57.1mlEDTA

8、（O.5m