迫下植物组织膜脂过氧化产物的测定.ppt

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1、实验八重金属离子胁迫下植物组织膜脂过氧化产物的测定——（MDA法）一，实验目的与要求掌握比色法测定植物组织MDA含量的方法和步骤；观察重金属胁迫下植物组织膜脂过氧化的程度。二，实验原理MDA是植物细胞膜脂过氧化反应的最终产物之一。逆境胁迫导致自由基（O·2、OH•等）积累，诱导细胞膜中的不饱和脂肪酸发生过氧化反应。MDA的积累加剧对细胞的伤害。MDA可与蛋白质、核酸等结合使之失去其活性,从而进一步破坏了生物膜及细胞内物质的结构与功能,最终导致植物受伤害,甚至死亡。在酸性和高温条件下，MDA可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲氚，在

2、532nm处有最大光吸收。排除干扰：蔗糖与TBA反应后，在450nm有最大光吸收，在532nm也有光吸收，通过公式排除干扰。三，实验材料与试剂材料Cd2+处理7d的菹草叶片；试剂10%三氯乙酸（TCA）；0.6%硫代巴比妥酸（TBA）。四，实验步骤MDA的提取：0.1g植物叶片洗净、擦干、剪碎，置于研钵中加少许石英砂、5mLTCA（分次），研磨匀浆后转移至离心管。4000rpm离心10min，上清液即为样品提取液。2，显色反应与测定2mL提取液+2mLTBA，混匀，沸水浴15min，迅速冷却。另取２mLTCA+2mLTBA同样操作，为对照液。

3、反应液3500rpm离心15min，取上清液，测量体积（Ｖ），以对照液调零，测定532nm、600nm、450nm处的光吸收值。3，计算含量MDA的浓度：Ｃ(µmol/L)＝6.45(A532-A600)-0.56A450MDA的含量含量(µmol/gFW)=2.5*C(µmol/L)*V(L)/M(gFW)