冰冻切片制作及质量控制.ppt

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1、云南省肿瘤肿瘤医院病理科李磊浅谈冰冻切片的体会影响术中病理诊断准确性的因素低温对组织的损伤,细胞着色力及快速出片影响1切片破碎、皱褶多、空洞、冰晶现象2切片厚薄不均、细胞重叠、色调不正3颜色对比不协调、染色不均、模糊不清4病理申请单书写不规范、送检不及时等5取材速冻如何提高冰冻切片的质量技术员温度切片固定染色包埋相互沟通理解取材医生临床医生技术员诊断医生取材送检组织宜新鲜、及时并避免遇水取材器械保持干燥、清洁组织本身含水较多则可用滤纸吸干避免不必要的脂肪附着通过申请单的病史及所取组织有初步认知程度小结：以上诸多要求，其实我们最主要的目的就是从根源上控制冰晶的产生，因为冰晶会导致细胞

2、间针状裂隙，细胞结构改变，细胞核普遍增大，影响诊断准确性。冰冻组织的包埋包埋组织时应将组织周边多留出O.C.T.用于牵引展开切片之用,否则出刀、入刀处会有皱褶影响制片效果。O.C.T.中的小气泡应尽量去除,以免影响旁边组织产生挤压和皱褶。较小的组织在包埋时可以先制作一个O.C.T.冻托,待冻托基本凝固时,将组织放在冻托上,再在周围放上O.C.T.后速冻。囊壁类组织需要立埋时,可将几条囊壁紧靠一起卷成U字形,可以帮助囊壁更好保持侧立。OCT的放置不宜过多，太多了影响速冻时间产生冰晶。包埋速冻为什么速冻呢？如何才能保证速冻？尽量减少冰晶的产生当然是为了减少冰产生冻锤的使用半导体制冷液氮

3、冻锤的使用在组织冷冻过程中,组织内可产生大量的冰晶影响冰冻切片的诊断,为了防止组织内冰晶的产生最好的办法是使用冻锤。新鲜标本包埋后放入冷冻台时,不能将冻锤马上按压在组织上,那样会使组织受挤压变形。应该待O.C.T.60%~70%凝固时再将冻锤轻压在组织上,这样既能防止冰晶的产生又能得到较平整的切面。温度温度过低组织过硬温度过高硬度不够小结：技术员切片温度组织硬度控制最佳温度是获得既薄又完整切片的基础1温度过低组织过硬导致切片破碎2温度过高硬度不够无法切片3切片组织冻结后将组织连同样本托固定到冷冻头上,设定切片厚度4um。用样品快进按钮将样品移近刀口,调整要切的平面,利用慢进按钮先粗

4、切修出组织最完整切面后细切1~2张弃用,继续细切时左手持毛笔轻拉O.C.T.边缘,右手切片,双手匀速配合。待组织切片完整拉下铺于组织样品上,（也可以使用废片轻轻拖至切片刀刃上，右手半切组织过程中，顺势将废弃组织与待切组织片粘连，轻轻向后拉动，当组织切到位点以后，就形成一张完整的切片）再用常温载玻片粘贴后迅速放入乙醚酒精混合固定液中中固定2分钟左右。切片注意事项1、样本托放入机头时，必须根据组织的结构及走势来放置。2、较硬的组织切片时，组织表面呈胶冻状时，将其修切去，因为冷冻是自下而上，表面呈胶冻状时(例如内膜癌的子宫肌壁带全层)，下面组织已符合切片最佳时机。3、组织过冻时，可带上薄

5、膜手套用拇指置于组织块表面几秒钟。4、组织有部分不需要或阻碍我们获得高质量切片时，可将其挖除。5、切片时，注意观察组织表面有无包膜，结节，但修片时也必须注意观察重点病变的微小病灶避免修切过度，造成误诊，漏诊，切片厚度4~5um，淋巴结切片3um为宜。OCT疑似病变组织诊断医生所取材组织冷冻常见问题及对策1、取材常见问题及对策1.1取材常见问题及对策组织被挤压:取材刀剪必须锋利，切割时不可来回锉动夹取组织时切勿猛压，以免挤压损伤组织。1.2组织块过大:冷冻时间延长易产生冰晶，在不影响病理诊断的前提下，标本取材尽量小一些切片后用载玻片贴片时手不能颤抖,而且在贴附组织时手要有一个向下伸展

6、的动作,切片机的盖打开越小越好。2.组织贴附不平或有皱褶:常见于组织结构软硬不同的组织,解决方法:标本较硬的部分摆在上端,先切较软的部分,依次切到硬的部分,同时用毛笔轻轻地展开,或用抗卷板才能切出完整的切片。3.组织挤压、皱缩:4.组织破碎组织破碎:如果组织冰冻过头,使之发脆就会发生破碎,这时用手贴在组织上片刻稍加温使其软化即可切出完整的切片。5脱片冰冻切片一般很少脱片,偶尔见于坏死组织或纤维较多的组织，或者载玻片不清洁切片太厚或组织本身的原因。解决方法:将组织切片切得更薄2-3um,切片固定后用吹风机吹干或用防脱片贴片后染色，染色时轻拿轻放，防止人为脱片。6冷冻欠佳致切片困难:不

7、易成形，产生搓板状，厚薄不均破碎或糊糊状:组织冷冻时间不够或冷冻机内设定的温度未达到要求可延长冷冻时间或调低冷冻机冷冻温度若为刀片的温度不够冷，要预冷刀片。7、切片出现冰晶主要是冷冻速度不够快捷，组织取材太厚、切片时组织温度太低、动作力度过大等因素造成。因此组织取材要适中为避免组织脱落，取好的组织底部及周围要及时入放适量的OCT,然后迅速放入冷冻机内,不宜过多,否则会影响速冻时间而产生冰晶染色常见问题及对策细胞核不清晰，核浆染色对比度不好应选择合适的苏木精和伊红配方，