基因工程的基本操作程序zhang.ppt

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1、基因工程的基本操作步骤提取目的基因，目的基因与运载体结合，将目的基因导入受体细胞，目的基因的表达和检测看课本P8的图DUCK179制作补：原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控遗传信息表达的核苷

2、酸序列，在该序列中，最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。启动子补：真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码序列：包括非编码区和内含子原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的____

3、__区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码一、目的基因的获取1、目的基因主要是指______________________编码蛋白质的结构基因2、获取目的基因的常用方法有哪些?（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成(一)从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）1.基因文库基因组文库与部分基因文库的关系DUCK179制

4、作基因文库的构建模式图通过对受体菌的培养而储存基因DUCK179制作如何从基因文库中得到所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性。DUCK179制作③利用PCR技术扩增目的基因PCR:聚合酶链式反应：是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需要设计引物。DUCK179制作(二)利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术聚合酶链式反应体外特定D

5、NA片段②原理：__________DNA复制过程③条件：_______________________、_______________、___________(前提条件)、_________,__.已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物DNA聚合酶能量a、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________氢键单链DNAb、退火（复性25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合c、延伸（70℃-75℃）：酶的作用下，从引物开始进行互补链的合成1、反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA

6、，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA杂交双链(单链RNA/单链DNA)单链DNA反转录酶核酸酶HDNA聚合酶双链DNA(目的基因)(三)人工合成2、根据已知的氨基酸序列合成DNA法：根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成1.用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。2.用_____________

7、切断目的基因，使其产生_________________。(二)基因表达载体的构建——核心3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制酶的黏性末端切口DNA连接酶相同质粒DNA分子限制酶处理一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）——核心同一种(二)基因表达载体的构建4.过程:5.基因表达载体的组成：复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因它们有什么作用？启动子：位于基因的首