无菌Microsoft PowerPoint 演示文稿.ppt

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1、无菌检查与微生物检查无菌检查的起源：1665年，欧洲勃兰登堡候国御医约翰·西吉斯蒙德·埃尔斯霍尔茨发表了《新灌药法及其方式方法》1831年，西欧霍乱肆虐，微粒拯救在死亡线上挣扎的病人，舒格兰医生赖特大胆启用静脉输液疗法，他将大量煮沸过的食盐水静脉输注给霍乱病人使大部分病人得救。赖特在实践中观察到了输液产生的“注射液”随着显微镜的发明和微生物的发现，人们开始了输液无菌检查的研究。无菌检查法的发展历史国际无菌检查法的发展历史1925年直接接种法首先使用在英国1932年英国药典推荐使用直接接种法无菌测试。1936年美国药典

2、滴十一章首先引用单个培养基的直接接种法。1950年美国药典第十六章推荐使用FTG和SB两种培养基分别培养需、厌气菌和真菌。1957年美国FDA和MILLIPORE公司介绍膜过滤法用于抗生素无菌测试。1963年英国药典63版收载薄膜过滤法无菌测试。1965年美国药典引用薄膜过滤法用于非抑菌性药品的无菌测试。1971年欧洲药典第二版公布参照薄膜过滤法无菌测试。1978年欧洲药典修订版发行公布推荐使用薄膜过滤法无菌测试。1988年美国FDA规定假如第一次无菌检查不符合规定的样品不再复试，这一批次的药品应报废。排除了药品无菌

3、阳性后再测试的机会。1998年英国药典1998版规定无菌检查以一次检出为准，取消复试。2000年美国药典24版规定无菌测试以一次检出为准，取消复试。我国历版药典无菌检查法的发展历史1953年版实验环境仅要求为半无菌操作箱；用一种培养基的直接接种法，取样量2支/瓶。1963年版仅收载直接接种法；用三种培养基分别培养细菌和霉菌。1977年版开始收载简单装置的薄膜过滤法限于抗生素样品。用二种培养基指明分别培养细菌和霉菌。1985年版要求实验环境为紫外线灭菌的无菌室；薄膜过滤法限于抗生素样品；开始收载需、厌气菌培养基及霉菌培

4、养基。1990年版与85年版相同，无发展。1995年版开始要求对培养基进行灵敏度检查。2000年版规定试验环境为100级洁净度。要求全过程防止微生物污染，检验量从2支/瓶增加为6～11支/瓶；50ml以上大容量液体也用薄膜过滤法检查。首次收载了全封闭无菌测试技术。2005年版收载隔离系统，强调洁净度的验证，培养基适用性检查和灵敏度检查；增加稀释液、冲洗液的品种；开始明确规定检验方法的验证要求；应优先采用薄膜过滤法；延长培养时间为至少14天、取消复试。无菌检查操作1）按操作sop规定，供试品在移入缓冲间前应除去外包装、

5、用适当消毒液擦拭或浸没消毒外表面、编号，培养基同样用消毒液擦拭外壁，然后连同其他灭菌用品（包括无菌衣、帽、口罩等）移入物流缓冲间，开启洁净室（区）紫外灯和空气过滤装置进行灭菌1小时以上。2）按操作sop规定，实验人员用肥皂、水清洗双手，关闭紫外灯，换灭菌鞋进入人流第一缓冲间，用消毒溶液消毒双手后戴无菌衣帽、口罩及无菌手套。再消毒双手或换第二付手套后经传递窗将实验物品移入洁净操作间。3）将供试品和实验用物品按实验流程安置在超净台上注意不干扰洁净空气层流、及方便取用。4）布置好日常检验同时的无菌室和工作台面动态的沉降菌、

6、浮游菌监控测定。5）用75%乙醇消毒双手和工作台面。6）用接触碟法采集、监控实验开始前物品表面、人员无菌衣、操作双手手套的表面菌。7）供试品处理和接种培养基：点燃酒精灯，用无菌75%乙醇棉球擦拭供试品外表面，用灭菌工具开启供试品容器或包装，过火焰数次，在选定的方法接种培养基或进行混合、稀释等步骤后接种培养基。8）薄膜过滤法要求及操作步骤应优先采用全封闭式薄膜过滤器。应选择低吸附的滤器及滤膜。滤膜孔径应不大于0.45μm。直径约为50mm。使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过

7、滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。薄膜过滤法一般步骤取规定检验量（或经稀释等处理）直接过滤（三联筒）用冲洗液冲洗（每张膜每次100ml，总量不得超过1000ml）其中2筒分别加入适宜的培养基，1筒作阳性对照另取2联筒作阴性对照按规定条件培养14天加入适宜的阳性对照

8、菌按规定条件培养48-72小时阴性对照-、供试品-阳性菌生长良好+结果判断：符合规定9）直接接种法要求及操作直接接种法即取规定量供试品分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中。除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于10ml。培养基的用量和高