解磷解钾微生物筛选.doc

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1、解磷解钾微生物的筛选与初步鉴定微生物是土壤肥力的核心，土壤中的微生物不仅数量巨大，而且种类极多。许多微生物对土壤氮、磷和钾等养分的转化和供给起非常重要的作用。氮、磷和钾均是作物生长发育必需的大量元素。根瘤菌可以与豆科植物共生固氮,在生物固氮中占有重要的地位。溶磷菌、硅酸盐细菌(又名钾细菌)能够分解土壤中的固定态磷、固定态钾转化为作物可以直接吸收利用的有效磷、有效钾。因此，高效的解磷、解钾菌株对于提高土壤肥力具有非常重要的作用。一、实验目的1、从各类土样中筛选高效的解磷解钾菌株2、熟悉菌株筛选、分离纯化、鉴定等具体操作流程二、实验原理分别配制以磷酸钙、钾长石为唯一

2、磷源或钾源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用磷酸钙、钾长石的菌株才能够生长。因为磷酸钙、钾长石不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够利用磷酸钙、钾长石，则在培养基中形成以菌落为中心的透明圈，因此可以通过是否产生透明圈来筛选目的菌株。分别筛选细菌和真菌。为筛选到真菌，采用在培养基中加入链霉素方法来抑制细菌生长。三、材料和方法1、材料各处取得的土样；培养基种类如下（g/l）：（1）牛肉膏蛋白胨培养基：（2）解磷菌株筛选培养基：无机磷固体培养基：葡萄糖l0g，(NH4)2SO40.5g，酵母粉0.5g，MgSO4·7H2O0.3g，氯化钠

3、0.3g，氯化钾0.3g，FeSO4·7H2O0.03g，MnSO4·7H2O0.03g，Ca3(PO4)22g，琼脂粉18g，蒸馏水1000mL，pH7.2，ll5℃灭菌20min。（3）钾长石固体培养基：蔗糖5g，葡萄糖5g，(NH4)2SO40.5g，酵母粉0.5g，MgSO4·7H2O0.3g，磷酸氢二钠2g，FeSO4·7H2O0.03g，MnSO4·7H2O0.03g，钾长石2g，琼脂粉18g，蒸馏水1000mL，pH7.2，ll5℃灭菌20min。2、方法(1)筛选：1、配制0.85%的生理盐水，灭菌备用。2、取5g采集的土样溶解到45ml0.85

4、%的生理盐水中，37度。摇床摇30min左右，定为原液。制作浓度梯度10-2、10-4稀释度，分别取原液、-2、-4各100μl分别涂布于解磷、解钾筛选及牛肉膏蛋白胨培养基平板上，28℃倒置培养，牛2天，筛选3天。观察菌落生长，透明圈产生情况。牛肉膏蛋白胨培养基菌落计数，计算菌数/g土壤。（2）菌落挑取与纯化并保存：用接种环挑取较大透明圈的单菌落至筛选培养基平板，划线分离单菌落。培养后观察是否为纯菌，菌落形态一致，且验证是否有透明圈后挑取单菌落至解磷或解钾培养基斜面中培养至长好。若不纯则分别挑取形态不同的菌落分别在筛选平板划线，确定透明圈，重复挑取和纯化步骤。挑

5、取至斜面培养基中培养后，将斜面4度冰箱保存。（3）菌株复筛将有透明圈的解磷、解钾菌株各自从斜面上用接种环挑取一环，小心点种在筛选培养基上，每个平板点四个不同菌落，注意不要相互污染。28℃倒置培养2~3天观察比较透明圈大小，进行记录。（4）菌种初步鉴定：牛肉膏蛋白胨培养基。平板菌落、显微镜菌体形态观察、革兰氏染色、半固体穿刺（运动性）等，查伯杰手册，相关生理生化，定属。