M13噬菌体空斑实验.doc

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1、M13噬菌体空斑实验一、实验目的：1、了解M13噬菌体载体的一般结构、性质及感染特征。2、学习并掌握M13噬菌体载体的空斑纯化技术。二、实验原理：一个M13噬菌体的病毒颗粒感染一个细菌后形成一个噬菌斑。从感染细菌释放出来的子代病毒颗粒感染临近细菌，后者又可释放下一代病毒颗粒；如果细菌在半固体培养基上生长，自带病毒颗粒的扩散受到一定限制，诸如M13等丝状噬菌体并不裂解细菌，但可以使细菌生长速度降低至原来的1/2，在上层琼脂中生长的菌台的背景下，生长缓慢细菌形成了一个不断扩大到肉眼可见的噬菌斑。三、材料与试剂：1、M13噬菌体2、ER2738菌种3、LB培养基四、

2、实验步骤1.1、取5mlLB液体培养基于10ml的试管中，加入5ul四环素（20mg/ml），将大肠杆菌接入，37℃震荡（80-100rpm）培养过夜（12h）2.将2ml的ER2738培养液转入20ml的LB培养基中（1:10稀释），继续37℃震荡（80-100rpm）培养4.5h（不宜过快，否则，细菌性毛被破坏，噬菌体无法导入），即成为感受态细胞3.培养细菌时将水浴锅打开，43℃预热，并将LB平板置于37℃预热备用4.用装有LB培养基的EP管10倍稀释噬菌体，理想的稀释范围：扩增过的噬菌体108-1010倍稀释，未扩增过的104-105倍稀释5.将顶层琼脂

3、用微波炉或者电磁炉沸水融化，置于水浴锅中保温待用6.当大肠杆菌达到对数成长期，取大肠杆菌ER2738感受态细胞200ul于EP管中7.加入10ul-100ul（或者一定体积）一定稀释度的噬菌体溶液，快速混合，室温孵育1-5min8.将感染过的大肠杆菌的培养液倒入43℃顶层琼脂中，用vortex迅速混匀，立刻在预热的LB培养基上倒平板，迅速摇晃平板使顶层琼脂均匀展开并铺满表面9.室温静置5min左右使平板冷却凝固，将培养皿倒置37℃培养过夜10.第二天观察平板，对培养皿中的噬菌斑进行计数，计算约含有10-100个数量级的平板噬菌斑的具体数目（y），计算噬菌体效价

4、（pfu/ml）噬菌体效价=y*10x+2puf/ml分子生物学作业 1、什么是细菌的转化？ 2、在哪些生物中，RNA是唯一的遗传物质？ 3、与单个氨基酸对应的碱基序列叫什么？ 4、DNA的复制是全保留还是半保留的？ 5、在半保留复制中，在第一、第二和第三轮复制中，分别有多少含有一条亲代链和一条子代链的双连DNA分子？