DB43∕T 1370-2017 葫芦科蔬菜小西葫芦黄花叶病毒检测技术规程.pdf

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1、ICS65.020B16DB43湖南省地方标准DB43/T1370—2017湖南省标准信息公共服务平台葫芦科蔬菜小西葫芦黄花叶病毒检测技术规程TechnicalRegulationforDetectionofZucchiniYellowMosaicVirusinCucurbitaceaeVegetables2017-12-31发布2018-03-31实施湖南省质量技术监督局发布DB43/T1370—2017目次前言……………………湖南省标准信息公共服务平台…………………………………………………………………………………Ⅱ1范围………………………………………………………………

2、……………………………………12规范性引用文件………………………………………………………………………………………13术语和定义……………………………………………………………………………………………14仪器和耗材…………………………………………………………………………………………15检测方法………………………………………………………………………………………………26检测结果判定………………………………………………………………………………………2附录A（规范性附录）反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法…………………………………3附录B（规范性附录）反转录-实时荧光定

3、量PCR（RT-qPCR）检测方法………………………………6IDB43/T1370—2017前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注湖南省标准信息公共服务平台意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由湖南省植物保护研究所提出。本标准由湖南省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：湖南省植物保护研究所。本标准主要起草人：孙书娥、朱春晖、刘勇、张德咏、刘骏、张松柏、谭新球、张卓、陈远超。IIDB43/T1370—2017葫芦科蔬菜小西葫芦黄花叶病毒检测技术规程1范围湖南省标准信息公共服务平台本标准规定了葫芦科蔬菜小西

4、葫芦黄花叶病毒（Zucchiniyellowmosaicvirus，ZYMV）检测技术规程的规范性引用文件、术语和定义、仪器和耗材、检测方法、检测结果判定。本标准适用于葫芦科蔬菜作物小西葫芦黄花叶病毒的检测和鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1小西葫芦黄花叶病毒ZucchiniYellowMosaicVirus，ZYMVZYMV是马铃薯Y病毒属的

5、重要成员，病毒粒体长丝状。3.2反转录-聚合酶链式反应ReverseTranscriptase-PolymeraseChainReaction，RT-PCR在反转录酶作用下将mRNA反转录成cDNA，再利用PCR以cDNA为模板，扩增合成目的片段的方法。3.3反转录-实时荧光定量PCR检测法ReverseTranscriptase-QuantitativeReal-timePCR，RT-qPCR先利用反转录酶将RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板，然后在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法

6、。3.4阳性对照PositiveControl凡是确定可以出现预期结果的处理，称为阳性对照。3.5阴性对照NegativeControl凡是确定不会出现预期结果的处理，称为阴性对照。3.6空白对照BlankControl凡是不加处理因素的处理，称为空白对照。4仪器和耗材台式离心机、水浴锅、制冰机、超净工作台、PCR仪、qPCR仪、冰箱、灭菌锅、电子天平、微波炉、1DB43/T1370—2017水平电泳槽、凝胶成像系统、移液器、枪头、离心管、研钵、研棒、一次性PE手套、PCR管等。5检测方法在以下的两种方法中，均需设置阳性对照、阴性对照和空白对照。反转录湖南省标准信息公共服

7、务平台-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法见附录A。反转录-实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测方法见附录B。6检测结果判定根据附录A判定检测结果。检测结果为阳性，即判定该样品含有ZYMV；检测结果为阴性，则判定该样品不含有ZYMV。根据附录B判定检测结果。检测结果为阳性，即判定该样品含有ZYMV；检测结果为阴性，则判定该样品不含有ZYMV。2DB43/T1370—2017附录A（规范性附录）反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法湖南省标准信息公共服务平台1试剂和缓冲液除非另有说明，本标准中仅使用确认的分析纯试