猪源嗜性衣原体HB1043株主要外膜蛋白(MOMP)基因的分析及重组表达.doc

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1、·猪源嗜性衣原体HB1043株主要外膜蛋白（MOMP）基因的分析及重组表达作者：闫少侠,田永祥,泽文,袁芳艳,郭锐,段正赢,克礼,孟丽,周丹娜,栗绍文来源：《农业科学》2013年第04期        摘要：根据GenBank中衣原体主要外膜蛋白（MOMP）全基因序列设计特异性引物，以临床分离的衣原体病原中提取的衣原体全基因组为模板，利用特异性引物PCR扩增得到MOMP全基因序列。通过BLAST比对，结果显示其与已提交的猪流产衣原体CG1株的MOMP序列（EU531729）有1个碱基不同。根据对测序结果进行信号肽序列预测及切酶位点分析，选用BamHⅠ和SalⅠ双酶切

2、将目的蛋白序列克隆到表达载体pET-28a上，得到重组质粒pET-28a-MOMP。将重组质粒转化入E.coliBL21进行表达，表达产物使用镍离子亲和层析柱进行纯化得到目的蛋白rMOMP。目的蛋白经Western-blot检测，证明其具有免疫学活性。        关键词：猪流产嗜性衣原体；主要外膜蛋白（MOMP）；重组表达        中图分类号：S852.67文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）04-0949-04        CloningandExpressionofMajorOuterMembraneProteinofChlamyd

3、ophilaClinicalStrainHB1043fromSwine        YANShao-xia1，2，TIANYong-xiang1，LIUZe-wen1，YUANFang-yan1，GUORui1，DUANZheng-ying1，        YANGKe-li1，MENGli1，ZHOUDan-na1，LIShao-wen2        （1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinary，HubeiAcademyofAgriculturalSciences，Wuhan430064，China；2.College

4、ofAnimalScienceandTechnology，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China）        Abstract：Chlamydophilawasanobligateintracecullarparasitesandcouldinfecthumanandmultipleanimals.AccordingtothepublishedcompletenucleotidesequenceofChlamydophilamajoroutermembraneprotein（MOMP）intheGenBa

5、nkandthewholegenomeofChlamydophilaisolatedfromclinicalsamples，thewholegenomesequenceofMOMPgenewereobtainedbyPCR.ThePCRproductwassequencedandblastedwiththecommittedMOMPsequence（EU531729）fromstrainCG1ofswineChiamydophilaabortus.TheresultsshowedthatithadonebasedifferentfromtheCG1strain.Th

6、eextinctionenzymessitesBamHⅠandSalⅠwereselectedforcloningtheMOMPsequencetothepET-28a.TherestructuringplasmidpET-28α-MOMPwerethentransferedintoE.coliBL21andexpressed.ThetargetproteinrMOMPwaspurifiedbytheNiSepharose6FastFlowandprovedwithimmunocompetencebyWestern-blot.Word文档·        Keywo

7、rds：Chlamydophila；majoroutermembraneprotein；recombinedexpression        衣原体是一类细胞专性寄生的、大小介于细菌和病毒之间的革兰氏阴性微生物。衣原体感染在世界围均有流行，是一种能够引起人和动物患病的人畜共患病原体。依据衣原体核糖体rRNA的序列比对以及多态性限制性酶切位点的分析，将衣原体科分为衣原体属和嗜性衣原体属。        嗜性衣原体属包含鹦鹉热嗜性衣原体、流产嗜性衣原体、肺炎嗜性衣原体、家畜嗜性衣原体、猫嗜性衣原体以及豚鼠嗜性衣原体[1]。其中，危害最大的病原体主要是流产嗜性衣原体