实验一 蛋白质的两性电离和等电点的测定.doc

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1、第三章实验内容实验一蛋白质的两性电离和等电点的测定【目的】验证蛋白质的两性电离与等电点性质。【原理】蛋白质由氨基酸组成。蛋白质分子除两端游离的氨基和羧基可解离外，其侧链上的某些酸性基团或碱性基团，在一定的溶液pH条件下，都可解离成带负电荷或带正电荷的基团。因此，蛋白质具有两性解离性质。当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势相等，既净电荷为零，成为兼性离子，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点（isoelectricpoint,pI）。蛋白质在等电点状态时溶解度最低，容易沉淀析出。蛋白质在大于

2、其等电点的pH值溶液中带负电荷；在小于其等电点的pH值溶液中则带正电荷。蛋白质在等点电以外的PH值溶液中，因分子带有同种电荷而相互排斥，不易沉淀。本实验通过观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度来测定其等电点。蛋白质解离成阳离子蛋白质成兼性离子蛋白质解离成阴离子【器材】试管、试管架、滴管、刻度吸管。【试剂】1.5g/L酪蛋白醋酸钠溶液称取纯酪蛋白0.5g，加蒸馏水40ml及1.00mol/LNaOH溶液10.0ml，振荡使酪蛋白溶解，然后加入1.00mol/L醋酸溶液10ml，混匀后倒入100ml容量瓶中，用蒸馏

3、水稀释至刻度，混匀。2.0.1g/L溴甲酚绿指示剂该指示剂变色范围为pH3.8～5.4。指示剂的酸色型为黄色，碱色型为蓝色。3.0.02mol/LHCl溶液4.0.02mol/LHaOH溶液5.1.00mol/L醋酸溶液6.0.10mol/L醋酸溶液7.0.01mol/L醋酸溶液【操作】1.蛋白质的两性电离(1)取试管1支，加入5g/L酪蛋白醋酸钠溶液1ml，0.1g/L溴甲酚绿指示剂6～7滴，混匀后，观察并记录溶液的颜色。(2)用细滴管缓慢滴加0.02mol/LHCl溶液，边滴边摇，直至产生明显的大量沉淀，

4、观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。(3)继续滴入0.02mol/LHCl溶液，观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。(4)再滴入0.02mol/LNaOH溶液进行中和，边滴边摇，使之再度产生明显的大量沉淀，继续滴加0.02mol/LNaOH溶液，沉淀又溶解，观察并记录溶液颜色变化。2.酪蛋白等电点的测定(1)取试管5支，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂并混匀。表3-1酪蛋白等电点测定加入物（ml）12345蒸馏水2.4－3.01.53.381.00mol醋酸溶液1.6－－－－0.10mol醋酸溶液－4.01.0－

5、－0.01mol醋酸溶液－－－2.50.625g/L酪蛋白醋酸钠溶液1.01.01.01.01.0溶液的最终pH3.54.14.75.35.9静置室温20分钟(2)观察各管沉淀出现情况，并以－，＋，＋＋，＋＋＋，＋＋＋＋符号记录沉淀的多少。【结果及分析】【思考题】1．为什么说蛋白质是两性电离电解质，何谓蛋白质的等电点？蛋白质含有-COOH和-NH2两种基团-COOH酸性基团,可以电离出H+-NH2碱性基团,可以结合H+形成-NH3+,相当于结合H+使得电离出OH-所以说是两性电离的等电点就是蛋白质的净电荷为0

6、的PH点2.在等电点状态下，为什么蛋白质容易发生沉淀？由于蛋白质在等电点时净电荷为零,减少了分子间的静电斥力,因而容易聚集而沉淀,此时溶解度最小.3.本实验中酪蛋白处于等电点时则从溶液中沉淀析出，由此得出蛋白质在等电点时必然沉淀，此结论对吗，为什么？优质解答蛋白质在溶液中是呈胶体性质的.也就是蛋白质自身所带的电荷与水分子形成了双电层,因为这种双电层的存在,使得蛋白质胶体互相排斥,不至于在做布朗运动的时候相互聚集.等电点时,蛋白质的静电荷为0,也就破坏了这种双电层,导致蛋白质相互聚集在一起,从而形成大颗粒沉淀出

7、来