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时间:2020-07-06
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1、甲基绿派洛宁染色法观察细胞DNARNA分布实验目的1.学会制作血涂片2.熟悉甲基绿——派洛宁法显示核酸的原理与操作步骤3.观察DNA、RNA在细胞中的分布。实验原理1.电离作用:脱氧核糖核酸和核糖核酸都有磷酸基,又有碱基,故为两性电解质。在一定的条件下,可以电离而带电荷,因此都有一定的等电点。甲基绿、派洛宁为两种碱性染料,在水中电离后,都产生带阳电荷的离子,常与带负电荷的磷酸根形成盐键。甲基绿电离后,在五价氮处产生二个正电荷,碱性较强,易与双链DNA分子(胞核等电点pH3.8~4.2)进行极性吸着而结合,使DNA显示绿色;派洛宁电离后
2、仅产生一个正电荷,碱性较甲基绿弱,与单链RNA(胞质等电点pH4.6~5.2)吸附结合,使RNA显示红色。2.聚合作用:甲基绿对聚合高的DNA有亲和力,派洛宁对聚合低的RNA有亲和力。因此,甲基绿选染DNA,而派洛宁选染RNA。实验材料1.蟾蜍红细胞2.70%酒精95%酒精甲基绿派洛宁染色剂(5:3)3.载玻片镊子剪刀托盘显微镜手套实验步骤1.取蟾蜍(蟾蜍破髓,仰位剪去下颌、舌头)制备血涂片,干燥后滴加70%的乙醇溶液固定10分钟,晾干。2.滴染色液于血膜上,染15分钟。(或在染色缸中)3.蒸馏水冲洗,去染液。4.向染色液血膜滴加95
3、%乙醇溶液分色、同时倾斜载片弃液体,晾干。5.观察。BA实验结果A.10倍下的染色后的蟾蜍血细胞B.40倍下的染色后的蟾蜍血细胞显微镜下可观察到细胞核被染成紫色,细胞质被染成蓝色。讨论与结论1.制作血涂片的时候,要注意推片的角度,力度,速度,使血细胞分布均匀,厚薄适宜。2.要注意分色的时间和次数掌控,时间过长次数过多会导致观察到的血细胞染色不明显。3.染色效果不是很理想,可能是由于染液中甲基紫的含量较高。
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