过氧化物酶活性的测定.doc

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1、植物生理学实验报告实验题目：过氧化物酶活性的测定姓名班级学号一、实验原理和目的原理：过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化生成醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其它分子缩合，生成茶褐色物质，该化合物在470nm处有最大的吸收值，可用分光度计测量生成物的含量。目的：学习测定植物组织中过氧化物酶活性的方法。二、实验器具和步骤材料：女贞树叶器具：分光光度计、离心机、秒表、天平、研钵、磁力搅拌器试剂：0.1mo1/L过氧化氢；，0.1mo1/L磷酸缓冲液pH7.0；0.3%愈创木酚反应液：100mmo1／L磷酸缓冲液（pH7．0）

2、100ml于烧杯中，加入愈创木酚0.3ml，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解。步骤：1．称取植物材料约0.2g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液(pH7.0)6ml(分次加入[2ml,2ml,2ml],最后用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，过滤或以8000r／min离心15min，上清液为酶的提取液。2.1ml0.3%愈创木酚反应液，加0.8ml磷酸缓冲液7.0，加2ml0.1mo1/L过氧化氢，最后加酶液200ul（视酶活性大小而定，如酶浓度高可稀释后再测定），摇匀，立即在分光光度计470nm下测吸光度，从加入酶液时立即开启秒表记录时间，1min读数一次（也可2

3、min，视材料而定）。3．以每分钟吸光度变化0.01为一个酶活力单位。过氧化物酶活性(U)=△A470×稀释倍数/g.Fw.min.0.01三、实验数据和作业过氧化物酶活性(U)=△A470×稀释倍数/g.Fw.min.0.01=(0.133-0.124)*20/（0.2*2*0.01）=45四、数据分析△A470的值太小可能是由于叶片放置过久导致过氧化物酶活性丧失。五、思考题1）过氧化物酶在植物体内的主要作用是什么？答：它与光合作用、呼吸作用及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是因为过氧化物酶

4、能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度，而且发现早衰减产的水稻根系中过氧化物酶的活性增加，所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。（2）比色时为什么要在3min内完成。答：因为这个反应的速度很快，在一定时间里反应物就被消耗光。