石蜡切片方法.doc

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1、fú参照郭郛等方法(郭郛1988)①Duboseq-BrasiL固定液：苦味酸饱和溶液1份甲醛60份冰醋酸15份80%酒精150份⑤海登汉（Heidenhein）铁矾苏木精染色剂苏木精1g100%酒精50ml冰醋酸5ml甘油50ml硫酸铝钾（钾矾）5g蒸馏水50ml碘酸钠0.2g配制步骤：a.将苏木精溶解在15ml无水乙醇中，加冰醋酸搅拌溶解。b.加甘油，搅拌。c.加35ml无水乙醇。d.将钾矾在研钵中研碎，加热溶解在蒸馏水中。e.将温热的钾矾溶液缓慢加入到苏木精溶液中，并随加随搅拌。f.加碘酸钠促使溶液成熟。⑦2.5

2、%铁矾咬色、褪色液:硫酸铁铵（铁矾）2.5g蒸馏水100ml⑧洗液：95%酒精20份盐酸1份第一天①固定：将解剖好的消化系统浸入Duboseq-BrasiL固定液24小时以上，作为实验材料。第二天（早晨）②脱水经30%酒精→40%酒精→50%酒精→60%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精，逐级脱水。经80%酒精之前的各步可处理5分钟以上，之后各步处理应在5分钟以内。（70min左右）③透蜡（需要提前准备）将54-56℃的石蜡放在60℃恒温箱中融化。（需要提前准备）用二甲苯作为透蜡剂，将脱

3、水后的肠道先经1/2纯酒精+1/2二甲苯→二甲苯各处理5分钟，再将肠道放到二甲苯和石蜡的混和液（1:1）中浸12小时，最后用纯石蜡浸24小时以上（以上两步均在温箱中进行），确保石蜡浸入肠道各组织中。脱水和透蜡均在小烧杯或酒盅内操作。第四天④包埋用硬纸先折成小纸盒，放到水平桌面上，将盛有石蜡及材料的小酒盅从温箱中取出，置于酒精灯加热的水浴中（保持石蜡呈溶解状态即可，温度不可太高），把液体石蜡倒入小纸盒中，待稍微冷却，用吸管迅速将肠道从酒盅吸到纸盒的石蜡中，用解剖针调整好位置，然后小心将纸盒放在冷水中，使石蜡渐渐凝固，取出

4、剥去纸盒并编号。第五天⑤切片与贴片将蜡块修成大小适宜的蜡条，牢牢地粘在台木上，用手动切片机连续切片，厚度为5～6μm。贴片剂为蛋清加少许甘油，充分搅匀，蛋清要先过滤。在干净的载玻片上加极微量的贴片剂，用拇指涂匀，将切的蜡片放上，用滴管吸水沿蜡片一角向底面加水，然后在水浴锅上轻微烤片，使蜡片慢慢均匀展平，最后去除多余的水分。（提前一天准备）载玻片和盖玻片（即使是新的）用前必须先在洗液中浸一夜，洗去油污，然后用蒸馏水冲洗，再放到95%酒精中浸洗，最后用白细布擦净备用。⑥干燥将贴好的切片室温下干燥一夜。第十五天（早晨）⑦脱蜡

5、与染色在染色缸中进行。将切片放到两缸二甲苯中脱蜡两次，每次20分钟左右，然后进入以下步骤：1/2二甲苯+1/2纯酒精→纯酒精→95%酒精→90%酒精→80%酒精→70%酒精→50%酒精→蒸馏水处理，以上各步各5-10分钟，然后放到2.5%铁矾液中咬色15分钟，经蒸馏水漂洗后，再放到钾矾苏木精染色剂中染色15分钟，取出后用水漂洗，再将切片放到2.5%铁矾液中褪色、分色，随时镜检，直到染色效果满意为止。在以后的脱水步骤中，当脱水至90%酒精后，将切片放到95%酒精伊红染色剂中作双重染色，随时镜检。⑧脱水、透明与封片将染好色

6、的切片经30%酒精→50%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精伊红→95%酒精→纯酒精，逐级脱水各5分钟，然后经1/2纯酒精+1/2二甲苯→二甲苯透明3分钟。以上各步均在染色缸中进行。最后用中性树胶封片，干燥后贴加标签装盒，以待研究观察。