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《浙江眼镜蛇蛇毒镇痛多肽的分离纯化及其性质的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、药物生物技术PharmaceuticalBiotechnology2003,10(2):159～164159浙江眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒镇痛多肽的分离纯化及其性质的研究X1211王春晓,李新宇,王起振,刘岩峰(1.沈阳药科大学,制药工程学院,生物制药系,沈阳110016;2.河南省医药设计院,郑州450000)摘要研究浙江眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒的镇痛活性组分,为寻找镇痛效果好,而无成瘾性的新型镇痛药奠定基础。采用CM2Sephadex离子交换色谱和SephadexG250凝胶过滤色谱对浙江产眼镜蛇蛇毒中的镇痛活性
2、组分进行分离纯化。采用PAGE‰IEF及HPLC等实验方法对产物纯度进行鉴定。采用SDS2PAGE法和HPLC法测定产物的分子质量,用IEF法测定产物的等电点,用小鼠热板法与醋酸扭体法考察产物的镇痛活性。结果表明眼镜蛇毒经3次柱色谱后,产物AAP经鉴定为单一组分。AAP经SDS2PAGE法和HPLC法测定的分子质量分别是7128Mr和7125Mr,等电点是9158。AAP的痛阈提高百分率和扭体抑制率分别为9113%,7712%。眼镜蛇毒经3次柱色谱后得到具有镇痛活性的单一组分。关键词眼镜蛇毒;镇痛多肽;理化性质;药理作用+中图分类号:Q514
3、3文献标识码:A文章编号:100528915(2003)0320159206眼镜蛇科有4种蛇的蛇体或蛇毒可作药用,即鉴于国内外学者对眼镜蛇毒各组分的深入研金环蛇(Bungarusfasciatus(Schneider)),银环蛇究,其药用价值逐步被揭示,如神经毒素显示了独(Bungarusmulticinctusmulticinctus(Blyth)),眼镜蛇特的镇痛作用。国内曾出现“克痛宁”制剂用于临(Najanaja(Linnaeus))及眼镜王蛇(Ophiophagus床,但该制剂是经初步纯化的复合制剂,含较多组hannah(Canto
4、r)),它们在治疗关节炎或镇痛方面分,其毒副作用较大。为了充分利用蛇毒资源,探发挥着独特的作用。上述蛇毒与吗啡的镇痛作用索蛇毒镇痛的奥秘,本研究利用现代生化技术分离强度依次为:吗啡<金环蛇<眼镜蛇<眼镜王蛇,纯化眼镜蛇毒中具有镇痛作用的神经毒素,获得单而上述3种蛇伤的临床死亡率分别为:金环蛇一组分,并对其理化性质及氨基酸组成、药理活性80%,眼镜蛇8%,眼镜王蛇100%。因此,从镇痛进行了研究。效果及用药安全方面综合考虑,眼镜蛇属的蛇毒作1方法为镇痛药开发利用的前景最好。Monaelesser及Taguet于1933年曾报道眼镜蛇111Atr
5、a2analgesicpeptide(AAP)的分离纯化毒用于治疗晚期癌症病人,发现该蛇毒对有癌组织将溶胀好的CM2SephadexC225装入色谱柱压迫神经引起疼痛的病例有显著疗效。Lignens等(216cm×60cm),用0101molPL磷酸盐缓冲液(pH用眼镜蛇毒治疗伴有疼痛的癌症病例,发现蛇毒的610)平衡。100010mg粗毒溶于同种缓冲液中,上镇痛作用效果大于吗啡,而持续时间较长。眼镜蛇样。先用平衡缓冲液洗出前2个峰,再用直线梯度毒用于镇痛不会成瘾,不出现耐药性,相反地在出(0100～0165molPLNaCl)洗脱,流速为3
6、6mlPh,6管现疗效后用量却能减少。一些有吗啡瘾的病人可Ph。将收集到的活性组分经冷冻干燥,脱盐,再浓用此药来戒瘾。眼镜蛇毒的镇痛作用机理与吗啡缩;进一步用SephadexG250柱(116cm×100cm)纯类似,但无麻醉作用,比吗啡起效慢,但持续时间化,洗脱液为0115molPLNH4Ac缓冲液(pH710),流[1]长。速为16mlPh,4管Ph。得到的活性组分通过一个已X收稿日期:2002207216作者简介:王春晓,1968年3月生,女(汉族),辽宁沈阳人,原沈阳药科大学讲师,现中国药科大学生物制药学院2001级博士生,从事生物制
7、药方面的研究。Tel:02523271369,E2mail:nancycxwang@sina1com160药物生物技术第10卷第3期用0115molPLNH4Ac平衡好的CM2SephadexC225的对数和Rm作图,并求出回归方程。根据AAP的柱(116cm×120cm),直线梯度(0115～0160molPL相对迁移率求得该多肽的分子质量。NH4Ac)洗脱,流速为16mlPh,4管Ph。收集活性组11512HPLC法测定分子质量以110mlPmin流分冷冻干燥,得AAP单一组分。速在230nm下检测各种蛋白的保留时间,色谱柱112AAP的
8、镇痛活性测定(小鼠热板法)及洗脱条件同11412。以保留时间的平均值与标选取18～22g合格雌性小白鼠20只(以小白准蛋白分子质量对数分别作为横纵坐标,作图,求[7
