Lp-PLA2(人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2)定量检测.pdf

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1、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA)2和幽门螺旋杆菌抗体检测及临床应用杨宜娥内容一、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)1.Lp-PLA2是什么？2.检测原理、注意事项及结果解释3.Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系4.临床研究5.临床应用二、幽门螺旋杆菌抗体1.幽门螺旋杆菌的特性2.幽门螺旋杆菌抗体检测原理3.临床应用一、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)检测及临床应用1.Lp-PLA2是什么？•脂蛋白相关磷脂酶A2，英文缩写Lp-PLA2。•又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。•分子量为45KDa。•由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节，在血浆中主要与低密

2、度脂蛋白结合。•水解ox-LDL-C（氧化修饰的低密度脂蛋白胆固醇）上的磷脂，生成促炎物质lyso-PC(溶血卵磷脂)和ox-FA(游离的氧化脂肪酸)，后二者是促炎介质，能刺激粘附因子和细胞因子的产生，从而导致单核细胞由管腔向内膜聚集。因此具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。康尔克Lp-PLA定量检测试剂盒特点2•准确、可靠、重复性好•灵敏度高•简易、快捷，静脉取血2-5ml送检，1.5小时出结果•无需空腹，任何时间均可取血•性能达到美国同类产品水平•收费：350元，医保、新农合、公费医疗均能报销。2.1检验原理——ELISA2.2样品处理•样品收集、处理和保存：•血浆：用EDTA抗凝

3、管取血2ml，1500r/min离心10分钟，收集上清液。•血清：用普通管或促凝管取血2ml，4℃下放置30分钟后，1500r/min离心10分钟，收集上清液。•保存:血浆（清）如不即时检测，则须于-20℃保存，并避免反复冻融。2.3操作方法1）从冰箱中取出试剂盒，室温平衡20min，将标准品离心，1000r/min，1min2）分别加入80ul稀释液（1倍)和20ul待测样品或标准品于反应孔内,混匀,37℃温育20min3）弃去孔内液体，每孔加300ul洗液(1倍），振荡20-30sec后弃去洗液，重复4次，拍干残液4）加入100ul酶标记物，混匀，37℃温育30min5）重复步骤

4、3）6）每孔加入显色液100ul，混匀，37℃温育20min，避光7）加入50ul终止液8）立即用酶标仪在450nm条件下测定各孔OD值9）以OD值为纵坐标（Y），相应Lp-PLA2标准品浓度为横坐标（X），制作标准曲线10）根据样品的OD值计算得出样品的Lp-PLA2含量2.4产品性能指标剂量-反应曲线的线性•用logistic数学模型或其他数学模型拟合，剂量-反应曲线相关系数（r）应不低于0.9900。r2=0.99998r2=0.979172.4产品性能指标准确性•试剂盒标准品与相应浓度的企业校准品同时进行分析测定，用logistic数学模型或其他数学模型拟合，要求两条剂量-反

5、应曲线不显著偏离平行（t检验，︱t︱<2.447），以企业校准品为对照品，试剂盒标准品的实测值与标示值的效价比的平均值应在0.900～1.100范围内。灵敏度•试剂盒的最小检测值≦10ng/ml。2.4产品性能指标精密度•批内变异度（CV%）和批间变异度（CV%）均应不高于15.0%特异性•以试剂盒测定下列物质，测定值应符合要求：人血清白蛋白（浓度60mg/mL）、癌胚抗原(浓度100ng/mL），在本试剂盒上的测定结果OD值应不高于0.10。稳定性•试剂盒在2-8℃条件放置6个月，检测结果应符合上述几项要求。2.5注意事项•开封/瓶后，酶联反应板放入铝箔袋中封口干燥保存，其他试剂均

6、在2～8℃下恒温保存，温度过高或反复冻融将导致产品失效，有效期3个月。•使用前试剂盒应置于室温平衡20min，有助于提高检测准确性。•产品中的稀释液要稀释10倍后再使用，洗涤液要稀释20倍后再使用，否则会影响检测效果。•要使用经过校准的加样枪取样，取液时枪头要贴近液面，以免枪头沾有多余液体，造成取样体积不准，影响检测效果。2.6检验结果的解释•对临床的检测结果进行统计分析之后，175ng/ml以下正常,175ng/ml以上有意义。•如样本的Lp-PLA2的含量低于临界值，则视为正常；如高于临界值则提示为其动脉可能有粥样硬化炎症，且炎症与Lp-PLA2的含量成正比。3.Lp-PLA2与

7、动脉粥样硬化的关系动脉粥样硬化（AS)是造成心脑血管疾病的主要原因AS是一种炎症反应性疾病在粥样斑块形成、进展和最终破裂的过程中均有炎性介质的参与寻找一个能够反映这种动态变化过程的炎性介质就能够检测并跟踪动脉粥样硬化的严重程度目前脂蛋白相关磷脂酶A2（Lipoprotein-AssociatedPhospholipaseALp-PLA)已被国际专家公认为一种新2，2的炎性反应标志物4.Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系Lp-PLA2在粥样斑块形成中的作用血