行业标准：KJ 201913 食品中玉米赤霉烯酮的快速检测 胶体金免疫层析法.pdf

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1、附件13食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法(KJ201913)1.范围本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法。本标准适用玉米、小麦及其碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定。第一法比色法2.原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的玉米赤霉烯酮经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条中检测线（T线）上的抗原结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线（T线）与控制线（C线）颜色深浅的比较，对样品中玉米赤霉烯酮进行结果判定。3.试剂及材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T6682规定的二级水。3.1.试剂3

2、.1.1.乙腈。3.1.2.甲醇+水（7+3，体积比）。3.1.3.稀释缓冲液（胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置）。3.2.参考物质玉米赤霉烯酮的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。表1玉米赤霉烯酮参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量玉米赤霉烯酮Zearalenone17924-92-4C18H22O5318.36注：或等同可溯源物质。3.3.标准溶液的配制3.3.1.标准储备液：称取适量标准品，用乙腈（3.1.1）溶解，配制成浓度为1

3、00μg/mL的标准储备液。﹣18℃避光保存，有效期6个月。3.3.2.标准工作液：准确量取标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）100μL，置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μ稀/mL的玉米赤霉烯酮标准工作液，2℃～8℃避光保存，有效期1个月。3.4.材料玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为玉米、小麦及其碾磨加工品。4.仪器和设备4.1.移液器：100μL、200μL、1mL和5mL。4.2.旋涡混合器。4.3.离心机。4.4.电子天平：感量为0.01g。5.环境条件环境温度：20℃～30℃。空气相对湿度：最佳测定

4、湿度45%～65%。若湿度低于45%，相应延长待测液-试纸条反应时间，以质控实验为准；若湿度为65%～80%，微孔与试纸条拆开后立即使用，避免微孔与试纸条长时间暴露在空气中受潮；避免在湿度80%以上湿度进行实验。6.分析步骤6.1.试样制备按GB5491扦取的样品充分碾磨或粉碎混匀，过40目筛。6.2.提取准确称取试样5.0g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入20mL甲醇+水溶液（3.1.2），用旋涡混合器振荡3min，离心分层或静置分层，上清液备用。准确移取0.8mL稀释缓冲液（3.1.3）于1.5mL离心管中，加入25μL上清液，混匀，待检。6.3.测定

5、步骤依检验所需，取相应数量的金标微孔和试纸条，做好标记。吸取待检液200μL于金标微孔中，抽吸至孔底的紫红色颗粒完全溶解，孵育10min。将试纸条插入金标微孔中，反应3min～5min。从金标微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的样品垫，观察显色情况，进行结果判定。（若试剂盒冷藏保存，使用前需恢复至实验环境温度。）7.质控试验每批样品应同时进行空白试验和阳性质控试验，可根据检测样品量制定适宜频次的质控试验。7.1.空白试验7.1.1.试剂空白试验：除不称取试样外，均按6.2和6.3所述步骤操作。7.1.2.基质空白试验：准确称取空白试样，按6.2和6.3所述步骤操作。7.

6、2.阳性质控试验准确称取玉米赤霉烯酮含量为60μg/kg的质控样，按6.2和6.3步骤操作。或准确称取空白试样，加入一定体积的玉米赤霉烯酮标准工作液（3.3.2），使玉米赤霉烯酮添加量为60μg/kg，按6.2和6.3步骤操作。8.结果判定通过对比控制C线和检测T线的颜色深浅进行结果判定。8.1.无效结果无论样品中有无玉米赤霉烯酮存在，控制C线均会出现一条紫红色条带。若C线未显色，表明操作不正确或试纸条已失效，检测结果无效（见图1）。无效图1试纸条目视判定图8.2.阳性结果控制C线显色，检测T线显色比C线浅或者没有颜色，判定为阳性（见图2）。8.3.阴性结果控制C线显

7、色，检测T线显色比C线深或者一致，判定为阴性（见图2）。比色法图2试纸条目视判定图8.4.质控试验要求空白试验结果应为阴性，阳性质控试验结果应为阳性。第二法消线法9.原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的玉米赤霉烯酮经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条中检测线（T线）上的抗原结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过T线显色与否进行结果判定。10.试剂及材料同3。11.仪器和设备同4。12.环境条件环境温度：10℃～40℃。空气相对湿度：同5。13.分析步骤13.1.试样制备同6.1。13.2.提取准确称取试样5.0g（精确至0