疏水相互作用效果层析和反相层析.doc

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1、GEHealthcare疏水相互作用和反相层析技术原理和方法GEHealthcare生命科学产品使用手册抗体纯化手册18-1037-46重组蛋白手册蛋白扩增与简单纯化18-1142-75蛋白纯化手册18-1132-29离子交换色谱及色谱聚焦原理与方法11-0004-21亲和色谱层析原理与方法18-1022-29疏水相互作用原理与方法18-1020-90凝胶排阻层析原理与方法18-1022-18扩床吸附技术原理与方法18-1124-26微载体细胞培养原理与方法18-1140-62Percoll方法学与应用18-111

2、5-69Ficoll-PaquePlus淋巴细胞的体外分离18-1152-69GST基因融合系统手册18-1157-58二维电泳（固定的pH梯度）原理与方法80-6429-60目录简介………………………………………………………………………………………………………9第一章疏水相互作用层析的原理……………………………………………………………………12理论情况下的疏水相互作用层析……………………………………………………………………12水的作用………………………………………………………………………………………………12蛋白

3、结构………………………………………………………………………………………………13可逆的相互作用………………………………………………………………………………………14疏水相互作用分离的步骤……………………………………………………………………………14分辨率…………………………………………………………………………………………………17柱效……………………………………………………………………………………………………18选择性…………………………………………………………………………………………………19第二章疏水相互作用的

4、实践…………………………………………………………………………25简介……………………………………………………………………………………………………25纯化策略（CIPP）中的疏水相互作用层析…………………………………………………………25疏水相互作用分离的实际考虑………………………………………………………………………27筛选选择性……………………………………………………………………………………………30自动的疏水相互作用填料筛选，方法开发和优化…………………………………………………30手动介质筛选，方法开发和优化……

5、………………………………………………………………31样品性质和配基的选择………………………………………………………………………………33盐的选择和缓冲液制备………………………………………………………………………………33柱子和填料准备………………………………………………………………………………………38样品制备………………………………………………………………………………………………38样品上样………………………………………………………………………………………………39样品上样量…………………………………………………

6、…………………………………………39样品体积………………………………………………………………………………………………40温度……………………………………………………………………………………………………40洗脱……………………………………………………………………………………………………41线性梯度洗脱…………………………………………………………………………………………41逐步洗脱………………………………………………………………………………………………42流速………………………………………………………………………………

7、……………………35流速控制………………………………………………………………………………………………44洗涤和再平衡…………………………………………………………………………………………45分析结果和下一步……………………………………………………………………………………45规模化放大……………………………………………………………………………………………46仪器选择………………………………………………………………………………………………46疏水相互作用层析介质的保养………………………………………………………………………

8、47问题解决………………………………………………………………………………………………47理想的疏水相互作用分离：目的蛋白可以用梯度洗脱很好的分离………………………………47目的蛋白在梯度里很早洗脱，分辨率差……………………………………………………………47目的蛋白在梯度的末端洗脱，分辨率差……………………………………………………………48目的蛋白在梯度的中间