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时间:2020-07-31
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1、淡紫拟青霉的检测方法一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA培养基)配制:以北京路桥PDA培养基为例,按说明上配制需称取培养基4克,加水100毫升。2.培养条件:25℃-27℃;时间:72-96小时。二、检测与计数方法1.系列稀释称取适量的样品,加入带玻璃珠的三角瓶中,加入100mL的无菌水(无菌水中事先加入了分散剂3-5滴,分散剂可以是吐温,OP—10,用来分散菌团),用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后,上旋转式摇床200r/min充分振荡60min,,即成母液菌悬液(基础液)。2.用5mL无菌移液管分别吸取5
2、mL上述母液菌悬液加入45mL无菌水中,按1:10进行系列稀释,分别得到1:1×101,1:1×102,1:1×103,1:1×104……1:k稀释的菌悬液(每个稀释度应更换无菌移液管,每个稀释度瓶中徐放入适量的玻璃珠以便于菌液分散均匀)。3.加样及培养取1个适宜的稀释度,用移液枪吸取菌悬液0.1mL,加至预先制备好的固体培养基平板上,用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。此稀释度重复3次,同时以空白作对照,于适宜的条件下培养。4.菌落识别根据所检测菌种的技术资料,每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有
3、效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时,检测结果无效,应重做。5.菌落计数以出现20—70个菌落数的稀释度的平板为计数标准,分别统计有效活菌数目和杂菌数目。有效活菌数按式(1)计算,同时计算杂菌数:nm=kv1/(m0v2)×10-8 或 nv=kv1/(v0v2)×10-8 (1)式中:nm—质量有效活菌数, 亿/g nv—体积有效活菌数, 亿/mL —有效菌落平均数, 个k—稀释倍数v1—基础液体积, mLv2—菌悬液加入量,
4、 mLv0—样品量, mLm0—样品量, g重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上,因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来,这点与液态发酵产品不同。所以:①悬液中要加分散剂分散菌团;②震荡时间也要较液态发酵产品时间长,使用旋转式摇床控制在180——200r/min,时间为60min。
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