小鼠骨髓细胞染色体制备与观察.ppt

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1、实验二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察实验原理小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。实验目的与要求：1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。2.了解小鼠染色体核型。3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。器材与试剂内容与方法（一）小鼠骨髓细胞染色体制备预处理取材，收集细胞低渗固定、再固定滴片染色取材前2～3h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。腹腔内注射秋水

2、仙素2~3小时后，颈椎脱臼处死小鼠。小白鼠骨骼标本取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净注射器抽取生理盐水冲洗骨髓收集细胞：暴露骨髓腔，反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，收集到离心管中,定容至6ml.滴2~3滴于玻片上，吹气，在酒精灯火焰过火8次，做记号，凉干，染色滴片：滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。作业与思考题1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用？3、简述实验中应注意那些关键问题？（二）染色体标

3、本片观察1.标本片质量评价（1）细胞密度合适、均匀；（2）背景干净，细胞核和染色体清晰；（3）有较多的分裂相；（4）染色体分散较好。细胞密度染色体分散度2.染色体形态特征观察3.染色体计数（100×10）151699+16+15=401082222+8+10=404.细胞增殖指数统计细胞增殖指数=分裂细胞数分裂细胞数+间期细胞数×100%实验三细胞器的观察一、中心体二、高尔基体一、中心体（4×10）马蛔虫子宫横切片全貌中心体（10×10）中心体（40×10）二、高尔基体（4×10）脊神经节切片高尔基体（10×10）高尔基体（40×10）高尔基体（40×10）