革兰氏染色与荚膜染色课件.ppt

《革兰氏染色与荚膜染色课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、革兰氏染色与荚膜染色一、目的与要求：1、掌握革兰氏染色法和细菌荚膜染色法。2、观察菌体的一些简单结构。二、原理及说明：染料：用作细菌的染料是一些含有苯环为基本单位，并具有发色基和助色基的化合物，若助色基解离后带上正电荷者，能与酸性物质结合生成盐，系为碱性染料，如番红、结晶紫、孔雀绿等；反之，助色基解离后，带负电核能与碱性物质结合生成盐，称为酸性染料。一些具有两类性质的染料称为复合染料。细菌细胞等电点PH一般在2~5，能与中性，碱性及弱酸性的碱性染料结合，因此，通常采用碱性染料进行染色。染色可分为简单染色

2、和特殊染色。区别：前者只采用一种染料，适应于菌体一般形态的观察；后者采用两种以上的染料，用于研究细胞内部的构造。三、革兰氏染色法革兰氏染色法是把细菌用两种性质不同的染料进行处理，根据细菌对染色反应的不同，可区分为革兰氏阳性（正反应）和革兰氏阴性（负反应）两大类群，故又称为鉴别染色法，这是细菌学中极重要的一种染色法。在正常情况下，某种细菌经过结晶紫染色。碘液媒染，再以酒精脱色，最后以番红复染；如不被酒精脱色菌体呈紫色，称为革兰氏阳性（常以G+表示）；若为酒精脱色，则被番红色复染，使菌体呈红色，称革兰氏阴性

3、（以G-表示）。四：方法步骤1、菌株：大肠杆菌；金黄色葡萄球菌2、流程路线：涂片干燥固定草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥碘液媒染1min水洗干燥95%乙醇脱色15~20秒水洗干燥番红复染1min水洗干燥镜检(1)涂片干燥固定:21（2）草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥（3）碘液媒染1min水洗干燥（4）95%乙醇脱色15~20秒水洗干燥（5）番红复染1min水洗干燥镜检五、注意事项：（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。（2）严格掌握脱色程度，是革兰

4、氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。（3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。荚膜染色法一、原理及说明：某些细菌生长到一定阶段，在一定条件下会向细胞壁外分泌一层粘性的多糖类物质——荚膜。荚膜含水份多。疏松且较薄。它受热易失水变形。所以，一般不加热固定。荚膜不易染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而将不着色的透明的荚膜衬托出来。二、材料：钾细菌荚膜示意图：三、方法与步骤：1、总路线：涂片用1%结晶紫染色3分钟用20%CuS

5、O4冲洗镜检2、涂片：3、结晶紫染色：4、CuSO4冲洗：四、注意事项：（1）不能加热固定，否则荚膜受热失水收缩，失去原形。（2）涂片不要用力过猛，不要滴加水，以防破坏其荚膜原形.(3)要用CuSO4冲洗，不要用水。值日：5~8号五、作业：（1）大肠杆菌呈色，是革兰氏性菌；金黄色葡萄球菌呈色，是革兰氏性菌。（2）绘出荚膜形态图。荚膜示意图：革兰氏染色步骤涂片干燥固定草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥碘液媒染1min水洗干燥95%乙醇脱色15~20秒水洗干燥番红复染1min水洗干燥镜检荚膜染色步骤：涂片用

6、1%结晶紫染色3分钟用20%CuSO4冲洗镜检