HPLC第1节 概述与高效液相色谱仪课件.ppt

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1、高效液相色谱highperformanceliquidchromatography,HPLC1第一节概述高效液相色谱仪第二节HPLC基本理论第三节HPLC的主要类型和分离原理第四节固定相和流动相第五节HPLC分析条件的选择第六节定性与定量分析第七节LC-MS联用技术简介第八节超高效液相色谱法简介2第一节概述高效液相色谱仪概述HPLC与经典LC区别HPLC与GC差别HPLC的特点和应用高效液相色谱仪3概述高效液相色谱法（HPLC）：在经典液相柱色谱基础上引入气相色谱的理论和技术，采用高压泵、高效固定相、高灵敏度检测器发

2、展而成的一种分离分析方法。4一、HPLC与经典LC区别1．经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1~3cm，固定相粒径>100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，n↓）分析周期长无法在线检测2．HPLC：分离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径小<10μm，均匀，分离效率高高压泵输送流动相，分析速度快，分析时间大大缩短柱效高（H↓，n↑）采用高灵敏度检测器，提高了检测灵敏度可以在线检测5二、HPLC与GC差别相同：基本理论一致，兼具分离和分析功能，在线检测差别：分析对象、操作条件、流动相1．分析对象GC：能气化、热稳定性

3、好、且沸点较低的样品，占有机物的20%；HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制。用途广泛，占有机物的80%。2.色谱柱固定相操作条件GC：毛细管柱液膜柱温HPLC：键合相固定相粒度小流动相的极性63．流动相差别1）GC：流动相为气体种类少组分与流动相无作用力，只与固定相作用2）HPLC：流动相为液体种类多流动相种类较多，选择余地广；流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善R增加因素，对分离起很大作用；流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用；选用不同比例的两种或两种以上液体作为流

4、动相，可以增加分离选择性。7三、HPLC的特点和应用“三高”“一快”“一广”高柱效高灵敏度高选择性分析速度快应用范围广泛（可分析80%有机化合物）8高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪二、检测器9生产厂家国外：Waters公司、Agilent公司（原HP）、日立、SHMADZU（岛津）公司、戴安、赛默飞等；国内：大连依利特公司、上海分析仪器厂、北京分析仪器厂等。10HPLC仪器11液相色谱仪（2）12液相色谱仪（3）13液相色谱仪（4）1415流程及主要部件输液系统进样系统色谱分离系统检测系统数据处理系统16一、输液系

5、统（一）流动相储器与流动相处理1）流动相储器贮液瓶：玻璃或塑料瓶，配有溶剂过滤器，其孔径约2m；耐酸碱腐蚀；无色透明或棕色瓶；位置高于泵体，保持输液静压差；密闭。溶剂应经过0.45μm滤膜过滤（除去溶剂中的固体杂质）。输液管路顶端一般连有不锈钢或玻璃制成的专用微孔过滤头172）流动相的处理脱气原因：在系统内逸出气泡，影响泵的工作；影响检测器的灵敏度、基线稳定性在梯度淋洗时会造成基线漂移或形成鬼峰除去氧气的影响：流动相中的氧可能与样品、固定相反应使其降解；与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，提高背景吸

6、收；在荧光检测中，可能会引起荧光淬灭现象；在电化学检测中，氧的影响更大18脱气方法①加热回流脱气，②抽真空脱气③超声波振动脱气，④吹氦脱气⑤在线真空脱气机脱气Agilent1200HPLC在线真空脱气机原理示意图19（二)高压输液泵主要部件之一，压力：10-35MPa。泵：主要是柱塞往复泵式恒流泵要求流量稳定、流量范围宽、耐高压、耐腐蚀、适于梯度洗脱。20活塞型往复泵活塞型往复泵是液相色谱仪中使用最广泛的一种恒流泵21（三)梯度洗脱装置：等度洗脱、梯度洗脱梯度洗脱：随时间程序地改变流动相组成（极性、pH或离子强度）。线

7、性梯度、阶梯梯度按多元流动相的加压和混合顺序，分为高压梯度和低压梯度两种。高压梯度:利用两个输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后送入色谱柱，混合比由两个泵的流速决定。低压梯度:在常压下用比例阀将多种溶剂按比例混合后，用1个泵加压输至色谱柱。便宜，易实施多元梯度洗脱，常用。22高压梯度：一般只用于二元梯度，即用两个高压泵分别按设定的比例输送A和B两种溶液至混合器，混合器是在泵之后，即两种溶液是在高压状态下进行混合的23低压梯度来自于四种溶液瓶的四根输液管分别与真空脱气装置的四条流路相接，经脱气后

8、的四种溶液进入比例阀，混合后从一根输出管进入泵体。多元梯度泵的流路可以部分空置。24二、进样系统1）六通进样阀：进样量准确，重现性好。一般20μL装入样品出口进样采样环泵入溶剂进色谱柱25六通进样阀使用注意满阀和不满阀进样满阀进样时，注入样体积不小于定量环体积的5-10倍。消除管壁效应，置换流动相不满阀进样时，注入样体积不大于定量