行业标准：GBT 28103-2011 小麦线条花叶病毒检疫鉴定方法.pdf

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1、ICS65．020．01B16圆亘中华人民共和国国家标准GB／T28103—2011小麦线条花叶病毒检疫鉴定方法Detectionandidentificationofwheatstreakmosaicvirus2011—12—30发布2012—06—01实施宰瞀徽紫瓣警矬瞥霎发布中国国家标准化管理委员会“”。刖置本标准按照GB／T1．1--2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归El。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人

2、：郭京泽、廖芳、刘跃庭、张裕君、刘勇、崔铁军、王金成。GB／T28103—20”1范围小麦线条花叶病毒检疫鉴定方法本标准规定了小麦线条花叶病毒(wheatstreakmosaicvirus)检疫鉴定方法。本标准适用于禾本科植物种子和苗木中的小麦线条花叶病毒检疫鉴定。2规范性引用文件GB／T28103—2011下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN／T1840植物病毒免疫电镜检测方法S

3、N／T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3小麦线条花叶病毒基本信息小麦线条花叶病毒wheatstreakmosaicvirus，属于马铃薯Y病毒科Potyyiridae，小麦花叶病毒属Tritimovirus。缩写：WSMV。小麦线条花叶病毒传播途径有：汁液摩擦传播；种传；介体传播。该病毒容易通过汁液摩擦方式近距离扩散。该病毒能通过带病小麦种子的调运远距离传播。该病毒的传毒介体为小麦卷叶螨Aceriatosichella，成虫和若虫均可带毒传染，卵不传病毒。小麦线条花叶病毒其他信息参见附录A。4方法原

4、理小麦线条花叶病毒的形态学特征、分子生物学特性和血清学特性是该病毒检疫鉴定方法的主要依据。采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定方法、植物病毒免疫电镜检测方法、反转录聚合酶链式反应检测方法，确定样品中带有的小麦线条花叶病毒。5仪器设备、用具及试剂5．1仪器设备酶标仪、洗板机、恒温水浴锅、普通冰箱(o℃～4℃)、20℃低温冰箱、一80℃超低温冰箱、植物光照培养箱(温度可调范围为0℃～50℃)、超净工作台、电子天平(1／lo000g)、微量榨汁机、透射电子显微镜、低速离心机(转速为3000r／min～5000r／m

5、in)、PCR仪、纯水仪、电泳仪、凝胶成像系统。5．2用具可调微量移液器(2．5pL、10pL、100pL、1000pL、5000ttL)和相应的吸头、酶联板、封口膜、pH计或pH试纸条(广泛试纸和精密试纸)、1．5mL离心管、PCR反应管、容量瓶(500mL、1000mL)、解剖刀片、镊子、剪刀、吸水纸、白瓷盘、记号笔、标签、一次性手套。】GB／T28103—20115．3试剂双抗体夹心酶联免疫吸附测定的检测试剂(见附录B)。反转录聚合酶链式反应检测试剂(见附录c)。植物病毒免疫电镜检测试剂(见SN／

6、T1840)。6现场检测按照SN／T2122的规定进行检疫并抽取种子和种苗样品。7实验室检测对样品进行双抗体夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA)，检验程序见附录B。对样品进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定，检验程序见附录C。对样品进行植物病毒免疫电镜(IEM)测定，检验程序见SN／T1840。在电镜下观察到弯曲线状病毒粒子，测定其大小为15nmX700nm，病毒粒子周围有抗体晕圈，则IEM测定结果为阳性。否则IEM测定结果为阴性。8结果判定样品经过DAS—ELISA、RT-PCR测定或I

7、EM测定，其两种或两种以上测定结果均为阳性，则判定该样品带有小麦线条花叶病毒。否则判定样品不带有小麦线条花叶病毒。9样品保存与结果记录9．1样品保存在适宜环境中保存已鉴定带有小麦线条花叶病毒的样品。如叶片应在超低温冰箱中单独保存或冻干保存；生长的苗木应在植物光照培养箱中单独培育；种子应在干燥条件下保存。9．2结果记录与资料保存记录各项数据，包括样品的种类、来源和样品状况，检测的时问、地点、方法和结果，测定人员的签字。DAS—ELISA的测定结果应保存吸光值数据报告，RT-PCR测定结果应保存电泳照片，I

8、EM测定结果应保存病毒粒体照片。2A．1形态学特征附录A(资料性附录)小麦线条花叶病毒其他信息病毒粒子形态为弯曲线状，无包膜，长690nm～700nm，直径11nm～15nm。A．2地理分布GB／T28103—2011最初报道于美国，目前在美洲、北非、中东、中亚、东亚、东南亚以及欧洲、澳大利亚均有发生。在我国西北的甘肃、陕西等地区曾有发生。A．3寄主范围及症状小麦线条花叶病毒侵染许多小麦品种以及燕麦、大麦、黑麦、一些玉米品种和黍，还侵染多种