行业标准：GBT 28075-2011 萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型检疫鉴定方法.pdf

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1、ICS65．020．01B16囝园中华人民共和国国家标准GB／T28075—2011萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型检疫鉴定方法DetectionandidentificationofPseudomonassavastanoipv．phnseDficoZ口(Burkholder)Gardaneta1．2011-12-30发布2012—06—01实施宰瞀鹊紫瓣警糌瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会促19前言GB／T28075--2011本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准使用重新起草法参考

2、国际种子检验协会(InternationalSeedTestingAssociation，ISTA)的SeedHealthTestingMethods第7-023号标准《豌豆中萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型的检测》编制，与7-023：2008标准的一致性程度为非等效。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：林石明、陈青、黄蓬英、易建平、廖富荣、吴媛、陈红运、王宏毅。1范

3、围萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型检疫鉴定方法GB／T28075--20”本标准规定了萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型的生物学、血清学和分子生物学的检测鉴定方法。本标准适用于植物种子、苗木等繁殖材料及其产品中萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型的检测与鉴定。2萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型基本信息中文名；萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型(菜豆晕疫病菌)。学名：Pseudomonassavastanoipv．phaseolicola(Burkholder，1926)Gardan，Bollet，AbuGhorrah．Grimont8L

4、Grimont，1992。病害英文名：haloblightofbean同物异名：Bacteriummedicaginisvat．p^ns∞zifo缸(Burkholder)Link＆Hull，1927BacteriumpuerariaeHedges，1927Phytomonasmedicaginis(Sackett)var．phaseolicolaBurkholder，1926Phytomonaspuerariae(Hedges)Bergeyeta1．，1930P5eudo，”on口smedicag

5、inisvar．phaseolicola(Burkholder)Stapp&Kotte，1929Pseudomon口smedicaginisf．sp．phaseolicola(Burkholder)Dowson，1957PseudomonasmedicaginisBurkholder，1926Pseudomonasphaseolicola(Burkholder)Dowson，1943Pseudomonassyringaepv．p^口seoZicof口(Burkholder)Young，Dye＆Wil

6、kie，1978Xanthomonasmedicaginisvar．口haseolicola(Burkholder)Elliot，1951属原核生物界Procaryotes、变形细菌门Proteobacteria、卜变形细菌纲Gammaproteobacte血、假单胞杆菌目Pseudomonadales、假单胞杆菌科Pseudornonadaceae、假单胞杆菌属Pseudomonas。萨氏假单胞杆菌菜豆生致病型的其他信息参见附录A。3方法原理依据病菌在培养基上生长的菌落形态、碳源的利用情况、基于抗

7、原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附测定(DA孓ELIsA)、基于体外DNA合成技术的聚合酶链式反应(PcR)以及病菌接种后的致病特征等进行检测鉴定。4主要试剂本标准的检测鉴定方法主要使用以下试剂：蛋白胨、氯化钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、蔗糖、酪胺酸、甘油、硼酸、头孢氨苄、万古霉素、溴酚蓝、放线(菌)酮或制霉菌素、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、Tris一盐酸、EDTA、SDS(十二烷基硫酸钠)、CTAB(十六烷基三甲基溴化胺)、溴化乙锭等PCR相关试剂。1GB／T28075--20115主要仪器本标准的检测鉴定

8、方法主要使用以下仪器设备：超净工作台、高压灭菌锅、显微镜、培养箱、电子天平、离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、BIOLOG微生物鉴定仪、酶标仪。6病菌分离6．1种子样品的制备检查种子表面的为害状与异常情况，感病豆荚的种子可能皱缩，种皮有奶黄色的斑块。每份检测样品至少检测2000粒种子。根据检测种子样品的质量(g)，按照1：1．5(质量：体积)的比例，在样品种子中加入无菌蒸馏水，如500g种子则加入750mL；于4℃～5℃下静置12h～18h。取种子浸出液10mL