培养基制备技术课件.ppt

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1、培养基制备技术南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生实验课时：4学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：2人实验目的和要求掌握常用培养基制备的基本过程。熟悉常用培养基的种类及用途。熟悉高压蒸汽灭菌的使用。实验内容常用培养基（液体培养基、半固体培养基及固体培养基）制备。高压蒸汽灭菌器使用。一、培养基的种类（按用途分类）基础培养基营养培养基鉴别培养基选择培养基增菌培养基厌氧培养基培养基的种类（按物理性状分类）液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂。用于观察细菌动力、保存菌种。固体培养基：平板

2、、斜面。含2％～2.5％琼脂。平板：用于细菌的分离培养。斜面：用于纯培养、保存菌种。二、培养基制备的一般程序调配溶化矫正pH过滤澄清分装灭菌检定保存二、培养基制备的一般程序调配：按照培养基配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。另用量筒量取所需蒸馏水量。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。调pH值：用1NNaOH或1NHCl调至培养基规定的pH值，用pH试纸对照。二、培养基制备的一般程序分装加塞：注意不要污染棉塞。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。灭菌：不同培养基采取不同灭菌方法。检定：培养基灭菌后必须在37

3、℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。保存：一般至4℃保存备用。分装量的要求液体培养基分装量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌直立；半固体培养基分装量为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌趁热直立凝固；斜面培养基分装量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面；灭菌后斜面摆放斜面长度约为试管长度的2/3，且下端有1cm柱高；分装量的要求琼脂平板：先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。分装包扎培养基灭菌耐热培养基（如普通营养琼脂平板）：常用高压蒸汽灭菌，条件为103.43kPa，

4、15-20min；含糖培养基以68.95kPa，10-15min；不耐热培养基：如糖类、明胶和牛乳等。常用间歇蒸汽灭菌；富含蛋白质的培养基：用血清凝固器灭菌；对含高营养不耐热培养基：如血清,细胞培养液等。用滤过除菌。三、高压蒸汽灭菌器的使用灭菌器内加入适量的水，将包扎好的拟灭菌物品放入其中。盖好盖子，接通电源，进行加热。排除高压锅内的冷空气：可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。三、高压蒸汽灭菌器的使用当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为121℃，维持30min。对热不稳定

5、的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。高压蒸汽灭菌器使用注意事项无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态。高压蒸汽灭菌器使用注意事项布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果。定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以1周

6、为宜。