植物组织培养无病毒苗培养.ppt

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1、第六章无病毒植物的培养教学目的和要求(1）了解植物病毒的危害和培养无病毒植物的意义。（2）理解和掌握脱除植物病毒的原理及方法。（3）分离茎尖及培养方法。（4）掌握无毒苗木的鉴定方法。（5）掌握脱毒苗木的保存和利用方法。第一节植物病毒的危害和培养无病毒植物的意义病毒之所以致病不是由于消耗细胞养分、通过毒素杀死细胞，而是利用细胞内物质繁殖，干扰细胞的代谢过程，在寄主细胞内产生一些对细胞正常功能有害的异常物质和条件，这使得植物病毒病的防治较其他植物病害防治更为困难，常给生产带来灾难的损失，被称为“植物的癌症”。一、植物病毒的危害植物病毒已超过600种，严重危害着农业生产。在果树、

2、蔬菜、花卉、林木以及农作物上皆有发现。随着生产栽培时间的推移，危害越来越严重，发现的病毒种类也越来越多。病毒症状危害园艺植物的病毒数目如侵染菊花的病毒和类病毒有19种之多如无子病毒(CAV)潜隐病毒(CLV)B病毒(CVB)轻斑驳病毒(CMMV)矮化病毒(CSV)脉斑驳病毒(CVMV)退绿斑驳类病毒(CCMV)等4种病毒对草莓生产造成重大影响:斑驳病毒（SMoV）草莓黄边病毒（SMYEV）草莓镶脉病毒（SVBV）草莓皱缩病毒（SCrV）、甘薯根腐病.甘薯叶点病甘薯枯萎病甘薯黑痣病2.病毒的特性及其侵染多数植物病毒不经种子传播，多数以种子繁殖后代的植物，可以从轻度染病植株上采

3、集种子，播种繁殖，不会将病毒传至下一代。（专化性强的病毒除外，如豆类病毒——由一种专化性强的蚜虫传播)可随着种子传播。）对于有性生殖退化，仅能用无性繁殖方法繁殖的植物，一旦染病则毫无办法。母株一旦染病，病毒在其细胞内增殖，并通过插条、接穗、种薯、球根、鳞片传至下一代。通过昆虫作为媒介加速传播。３.植株脱病毒的意义植物组织培养脱病毒技术是植物细胞工程的重要组成部分，脱毒种苗的生产在提高作物质量和产量方面已显示出极大潜力，良种、新品种的脱毒组培苗的大面积推广和应用，有效地解决了因病毒引起的品种退化问题。因此，植物组培脱毒技术在农业生产的科学化、现代化中具有巨大的应用价值和经济效

4、益，还可减少农药的施用，改善生态环境条件，防止病害的蔓延与扩散，该方法已成为农业中应用最广泛的生物技术。脱毒苗病毒活力与温度的关系第二节脱除植物病毒的原理及方法一、物理学方法：X射线紫外线超短波高温都能使病素钝化，其中以热处理最常用。1.热处理脱除植物病毒的原理①病毒是DNA大分子，病毒进入植物细胞后；随植物细胞的DNA一起复制。热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去侵染的能力。②热处理是一种物理效应，与冷处理一样，它可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。（1）温汤浸渍处理法：将剪下的接穗或种植材料，在50

5、℃左右的温水中，浸渍3-15分钟至数小时。（2）热风处理法：让盆载植物在35-40℃高温下生长发育，热处理空气温度应逐渐升高，然后达到所需温度，同时必须保持一定的湿度和光照，以后可切取处理后新长出的枝条作接穗和砧木，或将热处理与组织培养结合效果更好。热处理脱毒2、愈伤组织热处理脱毒法方法：从患病植株上取叶片(茎片、鳞片、花器亦可)进行离体培养，诱导形成愈伤组织，然后将愈伤组织反复继代培养同时兼用热处理。常用处理温度及处理时间：温度：37-38℃时间：处理2周、4周或8周温度：50℃时间：3-15min。反复继代兼热处理，经历一定的时间(继代次数需试验)后，将热处理过的愈伤组

6、织转移到分化培养基中，诱导器官分化。果树作物：桃(无黄萎病)、苹果(花叶病)、葡萄(扇叶病毒)、甜橙、香蕉、李子、醋栗、梨、树莓、红莓苔子、草莓等。蔬菜作物：马铃薯、番茄、菠菜。花卉植物：蔓生长春花、康乃馨、菊花等。其他植物：曼陀罗等。例：烟草愈伤组织兼热处理钝化烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)获得无病毒株效果做法：A：从患病烟草植株上取5mm叶片培养，在MS附加IAA2mg/L+KT0.2mg/L的培养基上诱导愈伤组织。B：将其中一部分愈伤组织反复继代培养，继代培养中分别兼用25℃、30℃和37℃温度热处理8周。C：将热处理后的愈伤组织，转到MS附加IAA2

7、mg/L+KT2mg/L的分化培养基中诱导芽分化。D：将1cm长的芽转移到MS附加IAA2mg/L+KT0.02mg/L生根培养基，诱导根分化。E：完整植株获得后，移植到无毒土壤栽培并进行鉴定。结果表明：反复继代培养可获得无病毒株。3.低温处理脱除病毒菊花植株----5℃,4-7.5个月处理后进行茎尖培养,可以除去矮化病毒(CSV)和褪绿班驳病毒(CCMV),而单独的茎尖培养无此效果。二、化学方法使用农药是防治植物真细菌病害的主要方法，理论上讲，也应该是防治病毒的有效途径。有不少化学物质能抑制病毒复制，例如孔雀绿、