体外诊断试剂生产质量控制要点资料.ppt

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1、体外诊断试剂生产和质量控制要点主讲人:顾燕黎上海科华生物工程股份有限公司体外诊断试剂产品介绍一酶联免疫诊断试剂产品乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）二快速诊断试剂产品人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）三PCR核酸诊断试剂产品乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）四临床化学诊断试剂产品葡萄糖试剂盒（液体单试剂）（氧化酶法）一.酶联免疫诊断试剂产品【产品名称】乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）【包装规格】96人份/盒【预期用途】本试剂盒采用酶联免疫法原理检测HBsAg，适用于血清

2、或血浆类标本。酶联免疫法反应原理双抗体夹心法双抗原夹心法标本抗-HBs抗-HBs-HRPHBsAg乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）的原理采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。试剂盒组份1.微孔反应板2.酶结合物3.阳性对照4.阴性对照5.洗涤液6.显色剂A7.显色剂B8.终止液9.封片10

3、.说明书主要生产设备微孔反应板包被机微孔反应板全自动封闭生产线灌封流水线超声波洗瓶机全自动进口分装机生物安全柜酶标仪横枕式包装机生产工艺流程图合并分装纯化包被结酶纯化配制配制配制抗-HBs血清酶标用抗-HBs抗-HBs-HRP酶结合物反应板包板用单抗-HBs单抗-HBs腹水正常人血清、阳性血阴、阳性对照显色剂、终止液、洗涤液TMB、硫酸、吐温20成品半成品滴配半成品检定成品检定外购原辅料控制原辅料必须从合格供应商目录所载厂家购入。采购的生产用原辅料，均应符合药品的标准、包装材料标准、生物制品规程或其它标准，不得对产品

4、的质量产生不良影响。自制主要原料生产和质量控制要点工艺用水抗原抗体酶标记物基因工程HBsAg生产和质量控制要点生产工序质量控制要点细胞培养基因工程细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度，细胞的形态及传代速度。纯化收集的细胞培养上清液经抗-HBs亲和层析柱等纯化。层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、平衡、洗脱速度。基因工程HBsAg质量标准效价：ELISA纯度：采用SDS-PAGE功能性实验：阴性对照、阳性对照、阴性参考品符合率、最低检出量、精密性、稳定性蛋白浓度：用双

5、缩脲法测定单抗-HBs生产和质量控制要点生产工序质量控制要点细胞复苏及传代培养单克隆抗体细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度。腹水制备福氏不完全佐剂免疫，7-10天后单克隆抗体细胞悬液注射于F1代小鼠，10天后采集小鼠腹水，离心，制得单抗-HBs腹水。对数生长期细胞接种。腹水纯化用制备的单抗-HBs腹水，经饱和硫酸铵二步沉淀，经离子交换层析柱纯化即为单抗-HBs。层析填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、平衡、洗脱速度。纯化的得率。单抗-HBs质量标准纯度：采用SDS-PA

6、GE法蛋白含量：采用Lowry法效价：ELISA效价功能性检测：免疫活性、稳定性多抗-HBs生产和质量控制要点生产工序质量控制要点抗血清制备用福氏佐剂和纯化HBsAg抗原制成乳化胶乳剂注射实验动物，经多次免疫后，采集动物血清。动物的选择，乳剂配制的均一性。纯化抗血清，经亲和层析柱粗提后，正常人全血清等多种亲和层析柱等纯化制得。亲和柱的制备及使用次数，所用缓冲液的pH等的控制，纯化的收率。多抗-HBs的质量标准纯度：SDS-PAGE法检定蛋白含量：Lowry法效价：对流电泳法测定效价功能性检测：免疫活性、稳定性多抗-H

7、Bs-HRP生产和质量控制要点生产工序质量控制要点酶的活化HRP与NaIO4反应，再加入乙二醇制成活化的酶溶液。辣根过氧化物酶RZ值≥3.0及活化时间的控制酶的偶联酶溶液液加入抗-HBs抗体pH,温度及时间的控制还原酶反应液加入NaBH4溶液还原。还原时间的控制纯化饱和硫酸铵纯化纯度控制辣根过氧化物酶质量标准溶解性：应符合要求PH值：应符合要求活性测定：应符合要求RZ值：应≥3.0多抗-HBs-HRP质量标准免疫活性稳定性试验生产工序生产要点质量控制点反应板制备1包被液的配制pH值的控制2*反应板的包被包被液量的准确

8、性，反应板包被放置的温度、湿度及时间的控制3反应板的洗涤、加封闭液液量的准确性4*反应板的封闭房间温度的控制，封闭时间的控制5反应板的抽干抽干机的真空度、温度6*铝箔袋的热封房间的湿度控制，铝箔袋的密封性7*反应板的抽检应符合相关质量要求反应板制备生产和质量控制要点反应板制备包被液配制质量控制点：包被缓冲液pH测定方法：用pH计测定反应板制备反