公共场所卫生监测微生物检验技术(2014版).ppt

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1、公共场所卫生监测微生物检验技术公共场所卫生技术服务机构承担的工作•(一)空气、微小气候(湿度、温度、风速)、采光、照明、噪声等室内环境的卫生检验、检测与评价;•(二)顾客用品用具的卫生检验、检测与评价;•(三)游泳场(馆)和公共浴室水质卫生检验、检测与评价;•(四)公共场所饮用水(包括:自备水、直饮水、二次供水)卫生检验、检测与评价;•(五)集中空调通风系统的卫生检验、检测与评价。2013年公共场所卫生监测 微生物指标生活饮用水《生活饮用水标准检验方法》(GB/T5750)宾馆微生物指标《公共场所卫生标准检验方法》(GB/T18204-20

2、00)游泳池水微生物指标《公共场所卫生标准检验方法》(GB/T18204-2000)集中空调系统微生物指标《公共场所集中空调通风系统卫生规范》(WS394-2012)公共场所生活饮用水微生物检验指标:菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、贾第鞭毛虫、隐孢子虫生活饮用水中微生物指标名称单位限值菌落总数CFU/mL100总大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出耐热大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出大肠埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得检出贾第鞭毛虫个/10L<1隐孢子虫个/10L<

3、1水样的采集和保存采样的原则:1.采集的水样,必须具有代表性,能真实反映水质状况。2.在实验室检测之前水样中微生物数量应保持不变。采样容器1.采样容器应采用洁净、无色、无毒的硬质玻璃(又称硼硅玻璃)。样品瓶必须专瓶专用,切不可用实验室盛装过浓溶液的瓶作采样瓶。通常我们使用500ml的高压灭菌的细口瓶采样。2.容器及瓶塞、瓶盖应能经受灭菌的温度。3.容器洗涤:将容器用自来水和洗涤剂洗涤,并用自来水彻底冲洗后,用10%盐酸溶液浸泡过夜,然后依次用自来水,蒸馏水洗净。4.容器灭菌:分干热和高压蒸气灭菌两种。干热灭菌要求160℃下维持2h;高压蒸气

4、灭菌要求121℃下维持15min,高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用,应于60℃将瓶内冷凝水烘干。灭菌后的容器应在2周内使用。水样采集单独采样。同一水源、同一时间采集几类检测指标的水样时,应先采集供微生物学指标检测的水样。采样时应直接采集,不得用水样涮洗已灭菌的采样瓶,并避免手指和其他物品对瓶口的沾污。末梢水采集:采样前用酒精灯灼烧对水管口进行消毒,放水约5分钟后采集水样约玻璃瓶的80%。容积整个过程要快,稳。不要让水流过大,以免溅出,管口不要与瓶口接触,收集完应马上将瓶塞旋紧。水样保存方法黑暗处,4℃,4h内检测。如有游离余氯应在采样瓶消毒

5、前每125ml加0.1mg硫代硫酸钠溶液(10%)。菌落总数检测方法1.平皿计数法本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。菌落总数指在一定条件培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),1mL水样中所含菌落的总数。检验步骤生活饮用水•以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中,倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。•待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于36±℃培养箱

6、内培养48h,进行菌落计数。即为1mL水样中的菌落总数。水源水以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样,注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:10稀释液。•吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1000,1:10000稀释液筹备用。如此递增稀释一次,必须更换一支1mL灭菌吸管。用灭菌吸管取未稀释的水样和2个~3个适宜稀释度的水样1mL,分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检验步骤。菌落计数及报告方法菌落计数方法:先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5倍~10倍

7、的放大镜检查,以防遗漏。•两个平板若其中一个平皿有较大片状菌落生长时,应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。不同稀释度的选择及报告方法首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算,若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视二者之比值来决定,若其比值小于2应报告两者的平均效。若大于或等于2则报告其中稀释度较小的菌落总

8、数。若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。•

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