土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（已用）课件.ppt

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数专题2微生物的培养与应用一、课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH33、本课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌1、实例：启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有耐热的Taq细菌被筛选出来

2、。DNA多聚酶链式反应（PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。一、研究思路㈠筛选菌株㈡统计菌落数目㈢设置对照要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；方法：⑴抑制大多数微生物的生长⑵造成有利于该菌生长的环境结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板划线法或稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。2、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养基：在微生物学中，将允许特

3、定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素〖思考1〗①从物理性质看此培养基属于培养基，是由于加入了凝固剂。②从功能上看属于培养基，此培养基的只有尿素，能利用尿素的微生物可分泌脲酶，因此能在此培养基上生长，此培养基属于培养基。〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是。具有

4、只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长选择固体琼脂选择氮源〖思考3〗15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。4、培养基选择分解尿素的微生物的原理15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4活学活用1.在

5、缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出()A.乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌B.固氮细菌、大肠杆菌、放线菌C.固氮细菌、霉菌、放线菌D.固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌C（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（2）常用方法：稀释涂布平板法。每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，

6、C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。（二）统计菌落数目：1.活菌计数法（3）计算公式：（间接计数法）想一想，如何根据平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按以下公式进行计算。旁栏思考题每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。实例分析P22第二位同学的统计结果更接近真实值。因为第一位同学只

7、涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？都需要。第一位同学在该浓度下可以多涂布几个平板；第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与另外2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值，可以在该浓度下重新进行实验。注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度涂布三个或三个以上的平板，培养统计菌落数

8、，计算出菌落平均值。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。④恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右时为最好。2、显微镜直接计数：利