土壤中分解尿素的细菌的分离与计数总结课件.ppt

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1、尿素分子的立体结构土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+CO2NH3+H2O3、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。4、课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照（一）筛选菌株水生耐热细菌Taq(Thermusaquatic

2、us)——耐高温的TaqDNA聚合酶美国微生物学科布鲁克1966年发现耐热细菌在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。1、实验室微生物的筛选原理（P21）人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。（一）筛选菌株2、选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。（一）筛选菌株1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？碳源是葡萄糖，氮源是尿素2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？有筛选作用。尿素是培

3、养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。阅读22页本课题使用的培养基配方（二）微生物计数1、显微镜直接计数法1mm每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。1mm下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少?1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）5AB×1045A缺点：不能区分死菌与活菌1、显微镜直接计数：利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。㈡

4、.统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点2、滤膜法以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。（二）微生物计数3、统计菌落数目——稀释涂布平板法酵母菌的菌落特征：菌落形态特征与细菌相似，但比细菌大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，多数不透明，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落颜色单调，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。（二）微生物计数注意事

5、项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。③为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。④统计的菌落往往比活菌的实际数目低。平板菌落数统计注意事项1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。菌落数统计表格（取样0.1mL,稀释倍数106）平板组别恰当的稀释度、正确的涂布操作是成功地统计菌落数目的关键。思考1：如何根据平板上的菌落数推

6、测出每mL样品中的菌株数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M进行计算。C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积M：稀释倍数思考2：统计的菌落数往往比活菌的际数目高还是低，为什么？低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。思考3：为了增强实验结果的说服力和准确性，我们在实验设计时应该怎么做更合理？实例分析1第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其

7、中1个平板的计数结果与另外2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。实例启示1、在实验设计时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性。2、在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。（三）实验基本原则1、平行重复原则实例分析2想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异如