SKⅠ-Ⅱ增敏顺铂对SGC7901／DDP细胞周期的阻滞作用研究.pdf

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1、山东医药2013年第53卷第l7期·基础研究·SKI—lI增敏顺铂对SGC7901／DDP细胞周期的阻滞作用研究刘莹，朱祖安，朱正秋，蔡红星(1徐州医学院病理学教研室，江苏徐州221000；2徐州医学院附属医院；3徐州医学院法医学教研室，盐城卫生职业技术学院)摘要：目的探讨神经鞘鞍醇激酶1(Sphk1)抑制剂SKI—lI增敏顺铂(DDP)对SGC7901／DDP细胞周期的阻滞作用，并探讨其可能作用机制。方法将人胃腺癌耐DDP细胞株SGC7901／DDP进行体外培养后，分对照组、DDP组(DDP2．50mg／L)、SKI—IIa组(SKI-1I1．25IxmoL／L)、SKI—IIb组

2、(SKI—II10．00txmoL／L)、SKI—IIC组(SKI—lI1．25txmoL／L+DDP2．50mg／L)、SKI一Ⅱd组(SKI—II10．00IxmoL／L+DDP2．50mg／L)进行实验。采用MTY、流式细胞技术检测各组细胞生长、周期阻滞情况；免疫组化染色、Westernblot法检测细胞Sphkl、P—gP、p27蛋白表达；并分析Sphkl与P—gP、p27蛋白的相关性。结果DDP组、SKI—IIa组对细胞生长、细胞周期无影响；与对照组比较，SKI—IIc组可抑制细胞生长，使停滞于G。／G的细胞增加、S期细胞降低(P<0．05)。与对照组比较，DDP组的Sph

3、kl、P—gP、p27蛋白阳性表达率无统计学差异，SKI一Ⅱa组p27蛋白阳性表达率升高(P<0．05)。Pearson相关分析显示，Sphkl与P-gP呈正相关(r=0．550，P<0．01)，与p27呈负相关(r=一0．663，P<0．01)。Westernblot检测显示，DDP组未见明显改变，SKI一Ⅱb组、SKI—IId组的Sphkl、P—gP表达减弱，p27表达增强。结论SKI—II可通过抑制Sphkl蛋白下调P—gP蛋白、上调p27蛋白表达，增敏DDP对SGC7901／DDP细胞的周期阻滞作用。关键词：胃肿瘤；神经鞘鞍醇激酶；SKI—II；P．gP；p27doi：10．

4、3969／j．issn．1002—266X．2013．17．008中图分类号：R735．2文献标志码：A文章编号：1002—266X(2013)17-0020-03神经鞘脂类是广泛存在于真核细胞膜上具有鞘DDP对人胃腺癌耐DDP细胞株SGC7901／DDP的周氨基醇酰基的脂质，其代谢产物神经酰胺(Cer)、神期阻滞作用，旨在探讨其可能作用机制。经鞘氨醇(Sph)及神经鞘氨醇1一磷酸盐(S1P)在细1材料与方法胞生长、分化、物质运输、血管形成等生理、病理过程1．1材料人胃腺癌耐DDP细胞株SGC7901／中均发挥重要作用，且与肿瘤细胞的多药耐药存DDP购自南京凯基生物公司；SKI．I1

5、($5696)购自在关系-4]。Cer、Sph、S1P在细胞内相互转化，调Sigma—aldrich公司；注射用DDP购自山东齐鲁制药节三者间相互转化的关键酶神经鞘鞍醇激酶公司，细胞周期检测试剂盒购自联科生物公司，山羊(Sphk)在其中起重要作用。Sphkl蛋白表达和活动抗兔sP免疫组化染色试剂盒购自北京中杉金桥生与化疗敏感性相关，其siRNA或药理学抑制剂可逆物公司，P—gP、Sphkl、p27购自美国SantaCruz公司。转耐药。目前，国内对Sphk的研究尚少，尤其是1．2方法对其在肿瘤、胃癌耐药逆转中的作用尚未明了。顺1．2．1细胞培养将SGC7901／DDP细胞培养于铂(D

6、DP)是非特异性细胞周期阻滞剂，临床广泛用含有10％小牛血清、500ng／mLDDP、100U／mL青于治疗食管癌、胃癌等消化系统肿瘤，但肿瘤对铂类霉素和100U／mL链霉素的RPMI．1640培养液中，药物产生的耐药严重影响了其化疗的疗效，并成为在37℃、5％CO饱和湿度培养箱中培养。联合用临床主要限制铂类药物使用的理由。因此，针对耐药时，先用SKI-II预处理2h，再加入DDP。药逆转的研究一直是肿瘤研究的热点。2009～20121．2．2SKI．II、DDP对细胞的生长抑制率检测采年，我们观察了Sphkl蛋白抑制剂SKI-lI增敏用MTr法检测。将SGC7901／DDP细胞以每

7、孔1×10／mL的密度接种于96孔培养板，每孔100L，24基金项目：江苏省卫生厅指导性科研课题(Z201016)，江苏省“六大h后加入药物进行干预。实验分为对照组(RPMI一人才高峰”第七批高层次人才项目资助(032)。1640)、DDP组(DDP2．50mg／L)、SKI-IIa组(SKI—通讯作者：蔡红星20山东医药2013年第53卷第17期II1．25~moL／L)、SKI．Ⅱb组(SKI—II10．00txmoL／中出现淡黄至棕黄色为阳性细胞。光