GOLPH3、mTOR在胃癌中的表达及临床意义.pdf

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1、实用医学杂志2014年第3O卷第18期GOLPH3、roTOR在胃癌中的表达及临床意义彭金珍方晔赖铭裕摘要目的：探讨高尔基体磷蛋白3(Golgiphosphoprotein3，GOLPH3)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamyein，mTOR)在胃癌中的表达水平及其两者在胃癌发展进程中的临床意义。方法：分别收集术后胃癌组织、距癌缘3～5em癌旁组织和正常胃黏膜组织标本各5O例．通过逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)、蛋白印迹及sP免疫组织化学法联合检测GOLPH3mR

2、NA、inTORmRNA及蛋白的表达水平。结果：胃癌组织中的GOLPH3、mTOR在mRNA及蛋白水平表达均明显高于其相应的癌旁组织及正常胃黏膜组织(P<0．05)，其中在胃癌组中两者的表达与分化程度、淋巴结转移有关(P<0．05)，而与患者年龄、性别、浸润程度和胃癌组织学分型均无关(P>0．05)，且GOLPH3、mTOR在胃癌中的蛋白表达水平呈显著的正相关性(r=0．815，P<0．01)。结论：GOLPH3、mTOR在胃癌组织中的高表达且两者表达呈一致性，提示两者在胃癌的发生、发展及转移过程中发挥

3、着重要作用。关键词胃肿瘤：高尔基体磷蛋白3；哺乳动物雷帕霉素靶蛋白；逆转录聚合酶链反应；蛋白印迹：免疫组织化学法胃癌在全球范围内仍严重危害着人类健康和例．女性患者占l8例。年龄为34～87岁(平均生命，其发病率和病死率也一直居高不下，占全球62．5岁)。所取标本术前、术后均已行组织病理学肿瘤发病率的第四位及肿瘤病死率第二位[。大明确诊断，标本均在离体30min内取一部分置于量的研究已经证实，胃癌的发生是一个多步骤、一80。冰箱保存备用．余标本立即置于10％甲醛中多因素共同参与的呈进行性发展的过程，而且肿

4、固定。所有患者术前均未经放疗及化疗，临床资料瘤的形成还涉及了大量的癌基因，抑癌基因、转完整。移相关基因等的改变。高尔基体磷蛋白3(Golgi1．2主要试剂Trizol购自Invitrogen公司，逆转phosphoprotein3．GOLPH3)是近几年来新发现的录试剂盒购自Fermentas公司，GOLPH3引物、癌基因．目前国内外关于GOLPH3基因与肿瘤的mTOR引物及B．actin内参引物均由上海生工生物发生的研究均有报道。然而关于GOLPH3基因与科技有限公司合成，兔抗人GOLPH3多克隆抗体

5、胃癌的侵袭及转移的研究却较为少见。本研究试购自abcam公司、兔抗人roTOR单克隆抗体购自图通过观察及分析胃癌组织、相应的癌旁组织及CellSignalingTechnology公司；BCA蛋白定量试剂正常胃黏膜组织中GOLPH3及其PI3K／Akt／哺乳盒和ECL化学发光试剂盒均购自碧云天生物公动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路中mTOR司。HRP标记的二抗、B—actin抗体及链霉菌抗生素的表达情况，初步探讨GOLPH3及PI3K／Akt／蛋白一生物素一过氧化物酶(S-P)免疫组化试剂盒mTO

6、R信号通路在胃癌的发展进程中的关系及其和二氨基联苯(DAB)显色剂均购白北京中杉金桥相互机制．为探求胃癌早期治疗潜在靶点提供更生物科技有限公司等。多的理论及实验依据。l-3实验方法1资料与方法1．3．1RT．PCR半定量分析取约60mg标本组1．1一般资料采取广西医科大学第一附属医院织，加入适量Trizol后提取标本中的RNA，随后检2012—2013年胃肠外科行“胃癌大部分切除”患者测提取所得总RNA的浓度及纯度并用1％琼脂糖术后胃癌组织、距癌缘3—5cm相对应的癌旁组凝胶电泳分析其完整性。严格按照逆

7、转录试剂盒织及正常胃黏膜组织各50例。其中男性患者占32的说明书合成cDNA，随后进行PCR扩增反应。其中GOLPH3上游引物序列为5-TGTAAGTCAGATGCTCCAACAGG．3．下游引物序列为5．TCACCCAdoi：10．3969／j．issn．1006-5725．2014．18．025TTTGTCAAGAACGG．3：mTOR上游引物序列为5基金项目：广西教育厅科研资助项目(编号：201012MS059)一GGATGGCAACTACAGAATcACA．3．—F游弓l物序作者单位：53002

8、1南宁市，广西医科大学第一附属医院老年列为5．TTAr兀AGGCCCTCTGGrrrCA一3；内参照消化内科(彭金珍，赖铭裕，方哗为广西医科大学在读研究生)通信作者：赖铭裕E-mail：mylai9223@163．coin[3-actin上游引物序列为5．CTGGGACGACATGGA实用医学杂志2014年第30卷第18期首次将GOLPH3作为一个癌基因和肿瘤的发生联blot检测后发现，GOLPH3及mTOR在胃癌组及相系起来。通过对多种实