IL-7联合IL-2对脐血CD4^＋CD25^-T细胞体外诱导扩增影响的研究.pdf

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1、仉洁等IL_7联合IL-2对脐血CD4CD25一T细胞体外诱导扩增影响的研究第7期·879·doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．07．004IL．7联合IL．2对脐血CIM+CD25一T细胞体外诱导扩增影响的研究①仉洁郝京生②李俊甫邢龙龙②刘志文②钟理刘薇②(河北大学生命科学学院，保定071002)中图分类号11392．12文献标志码A文章编号1000-484X(2014)07-0879-06[摘要]目的：初步探讨IL-7联合IL-2对脐血CD4CD25一T细胞体外扩增的促进作用，建立稳定的体外培养扩增脐血CD4C

2、D25一Tregs的培养体系，比较诱导扩增后的CIMCD25Tregs和自然分选的CD4CD25Tregs对PBMCs功能活性的影响。方法：采用免疫磁珠分选法分选出脐血CIMCD25一T细胞和CIMCD25T细胞；加入不同浓度的细胞因子IL-7结合适当浓度的IL一2作为诱导剂，分析IL-7体外诱导CD4CD25一T细胞增殖的有效性及最适浓度。我们利用流式细胞术检测体外扩增后的CIMCD25一T细胞表型变化；MTS法检测体外诱导扩增的CIMCD25Tregs及自然分选的CD4CD25Tregs分别对成人外周血中单个核细胞增殖的抑制作用；RT-PCR

3、方法分析体外诱导扩增的C1MCD25Tregs及自然分选的CD4CD25TregsFOXP3基因、IL-l0基因和TGF-B基因的eDNA表达的变化。结果：经3周体外培养、各组细胞均有明显的扩增。IL-7诱导组的扩增最强。体外抑制试验显示体外扩增的Tregs对成人外周血中单个核细胞有明显的抑制作用，IL-7联合IL-2诱导CD4CD25一T细胞生成的CD4CD25Tregs具有较自然分选的CIMCD25Tregs稍弱的免疫抑制功能，其中IL-7浓度为4ng／ml，IL-2浓度为2000U／ml时诱导CD4CD25一T细胞生成的CD4CD25Tre

4、gs杀伤活性最强。结论：成功建立了CD4CD25Tregs的体外培养体系，联合应用IL-7、大剂量的IL-2和CD3／CD28单抗是体外诱导扩增CIMCD25一T细胞成为CIMCD25Tregs的优选方法，并且扩增倍数高、可持续高表达CD4及CD25细胞表型。[关键词]白介素7；脐血；CD4CD25T细胞；调节性T细胞EfectsofIL-7andIL-2onCD4CD25一TcellsproliferationinvitroZHANGJie，HAOJing—Sheng，LIJun-Fu，XINGL0ng—L0ng，LIUz-Wen，ZHONGL

5、i，LIUWet．CollegeofLifeScience，HebeiUniversity，Baoding071002。China[Abstract]Objective：ToexplorethepromotingeffectsofIL-7andIL-2onCD4CD25一TcellsproliferationinvitroandconstructastableculturesysteminvitroforCD4CD25regulatoryTcellsfromhumanumbilicalcordblood．Tocomparetheinhibitin

6、geffectsbetweeninducedproliferatedCIMCD25TregsandnaturallyisolatedCD4CD25TregsonPBMCsfunctionalactivity．Methods：CIMCD25一TcellsandCD4CD25Tcellswereisolatedfromhumanumbilicalcordbloodmononuclearcellsbymagneticactivatedcelsorting(MACS)systemandthenexpandedinvitro．Fourdifferentco

7、ncentrationlevelsofIL-7combinedwithproperconcentrationofIL-2wereaddedasinducerandtheeficiencyandoptimalconcentrationofIL-7oninducing，CD4CD25一Tcellswereanalyzedvia4differentmethods．FlowcytometrymethodwasusedtodetectthechangesofCD4CD25一Tcells．TheinhibitoryeffectofexpandedCD4CD2

8、5Tcellsonperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)wastestedbyMTS．Theexp