进境美国大豆幼苗中菜豆荚斑驳病毒的检测与鉴定.pdf

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1、南京农业大学学报H"$$I，E$（"）：!E%‘!D!H7"’&2+/"-8+29%2:;:&%.’/*’&+/<2%$)&(%*=进境美国大豆幼苗中菜豆荚斑驳病毒的检测与鉴定!!!!!"李彬，吴新华，粟寒，吴翠萍，安榆林，许志刚（!#江苏出入境检验检疫局，江苏南京"!$$$!；"#南京农业大学植物保护学院，江苏南京"!$$%&）摘要：从进口美国大豆中挑选具有典型斑驳症状的种子，在隔离温室内种植。出苗后，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（’()*+,-)(）进行菜豆荚斑驳病毒（./0123453667/89:;<，=>?@）的血清学检测。对=>?@血清学反应阳性的幼苗进一步采用反转录（AB）>CA

2、方法和测序方法进行鉴定。结果从大豆幼苗中筛选并鉴定出菜豆荚斑驳病毒。关键词：菜豆荚斑驳病毒；大豆幼苗；双抗体夹心+,-)(；AB*>CA；序列测定中图分类号：)D!E"；)DE&FG&!HHH文献标识码：(HHH文章编号：!$$$"$E$（"$$I）$"$!E%$E!"#$%&’&()%&*$*’+#)$,*"-*%%.#/&012（3456）*$%7#2*8+#)$2##".&$9’0*-:-#0&(),-=91!，JKL91*M;0!，)KN01!，JKC;9*291O!，(PQ;*791!，LKRM9*O01O"（!#S901O<;+16:TU+V96-1<2/W6931014X;0:0

3、1691/=;:/0;，P01Y91O"!$$$!，CM910；"#C377/O/3Z>7016>:36/W6931，P01Y91O(O:9W;76;:07K198/:<96T，P01Y91O"!$$%&，CM910）:+2%0)(%：BM/<3T./01?@）43;.7/0

4、169.34T<014[9WM（’()）+,-)(96#BM/?@23<9698/91CA014?@[0<?@；<3T./01CA；?@）属于豇豆花叶病毒科（C3

5、5389:940/），豇豆花叶病毒属（!"#"$%&’(）。该病毒可侵染豆科植物，主要是菜豆和大豆，在田间可由菜豆萤叶甲（!)&"*"#+*&%,-’&.+*+）、葡萄鞘叶甲（!"/+(0%(1&’22)+）、带斑黄瓜叶甲（3%+1&"*%.+1+/*)+*+）、北美豆芫菁（4%.+’*+［!］［"_E］$%**+*+）、墨西哥豆瓢虫（50%/+.62+$+&%$)(*%(）等传播；也可种传，大豆的种传率约$F!^。该病毒分布于美国［D］、加拿大［&］、巴西［G］和秘鲁［!］等美洲国家，在北美地区发生严重，目前中国还没有发［I］生及分布报道。据报道，受=>?@侵染的大豆，产量损失在EF$^‘&

6、"FD^，但与大豆花叶病毒（)?@）复合侵染大豆后，产量损失可高达GG^。目前中国每年大量从美国等疫区进口大豆，=>?@通过种子携带并远距离进入中国的可能性很大，加强对进口大豆是否携带=>?@的快速精确的检测，无疑具有十分重要的意义。菜豆荚斑驳病毒已列入我国新修订的检疫性植物病毒名录。由于=>?@在大豆中的低种传率，目前国内还未有从大豆幼苗中检出该病毒的报道。笔者通过挑选具有典型斑驳症状的种子，种植出幼苗后，用双抗体夹心酶联免疫吸咐法（’()*+,-)(）进行初筛，进而设计引物，利用两步法AB*>CA和一步法AB*>CA及序列测定的方法，对=>?@进行了鉴定。!H材料与方法=>=?疑似带毒大豆

7、种子的选择与种植材料来自南京口岸进境的美国大豆。根据症状特点，挑选具有斑驳症状种皮的大豆种子，经E^次氯酸钠表面消毒后，将种子播种于隔离温室内，所使用的盆钵和器具均经过消毒处理，所用的土壤需经灭菌处理。种植期间，温室按隔离检疫要求进行管理。??收稿日期："$$G$I$E??作者简介：李彬，农艺师，从事植物检疫工作，+*5097：79.91aY