抗孕酮单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用.pdf

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1、中国免疫学杂志2011年第27卷doi：10．3969／j．issn．1000—484X．2011．06．016抗孕酮单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用王斌刘一兵冯婷婷许文革韩世泉(中国原子能科学研究院同位素研究所，北京102413)中国图书分类号R392文献标识码A文章编号1000．484X(2011)06-0548．05[摘要]目的：获得一株特异性强，灵敏度高的抗孕酮单克隆抗体，用辣根过氧化物酶标记孕酮一1ls一羟基孕酮半琥珀酸酯制成酶标记物，建立酶联免疫分析(ELISA)方法，用于检测人血清中孕

2、酮含量。方法：用免疫原11a—OH一孕酮一BSA免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术，得到14株抗孕酮单克隆抗体；用反射免疫分析(RIA)方法测定抗孕酮单克隆抗体的亲和常数和交叉反应率。结果：获得的l4株抗孕酮单克隆抗体具有较高的亲和性和较小的价差反应率；建立ELISA方法学的灵敏度为0．12ng／ml；批内变异系数为7．5％～11．4％；批间变异系数为：8．2％～12．1％；回收率93．8％～124．7％；高值临床样品系列倍比稀释后，测定值与稀释度呈线性相关，相关系数为r=0．9957；与全自动化学

3、发光测定的临床样品值比对结果较好，线性方程为，一0．7894x+0．7600，r=0．9126。结论：方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。[关键词]孕酮；单克隆抗体；ELISAPreparationandidentificationofmonoclonalantibodyagainstprogesteroneWANGBin，—Bing，FENGTing—Ting，XU耽n—Ge，HANShi—Qn．DepartmentofIsotope，ChinaInstituteofAtomicEnergy，Be

4、ifing102413，China【Abstract]Objective：Thestudywasaimedtogethighlysv~cificandsensitiveagainstprogesteronemonoclonalantibodies．Theer~ymeconjugatewaspreparedbylabelingprogesterone一1ls—hemisuccinate(P_110一His)withHorseradishPeroxidase(HRP)toformP-1ls—His—HRP

5、，developmentahighlyspecificandsensitiveEnzymeLinkedhnmunosorbentAssay(EL1SA)tomeasureprogesteroneinhumanserLtm．Methods：TheBALB／cnlicewereinununizedusingtheantigenthatwastheconjunction1la-OH—Progesterone—BSAbyhybridomatechnique．TheAffinityConstantandRate

6、ofCrossReactionsweredeterminedbyRadioimmunoassay(RIA)．Results：14strainsagainstprogesteronemonoclonalanti—bodieswereacquired．TheELISA1omeasureprogesteroneinhmnmlserunlwasdevelopcxt．Thestandardrangeofthemethodwas0．3-1O0n．Theassaysensitivitywas0．12n#m1．The

7、intra—assayandinter-assaycoeficientsofvariance(CVs)vanedwas7．5％一11．4％and8．2％一12．1％．Analyticalrecovery'was93．8％一124．7％．Comparedwithdetectedvalueclinically，thecorrelativeequalionwasY=0．7894x+0．7600，r=0．9126．Conclusion：Methodologyappraisalresultswiththebas

8、icrequirementsofimmuneanalysis．[Keywords]Progesterone；Monoclonalantibody；ELISA孕酮(Progesterone)是一种甾体类激素，其分子科疾病的研究等有重要意义。临床检验血清中孕酮量为314，具有△4—3一酮基的21碳甾体结构，主要由含量的检测方法主要有免疫分析法、色谱法、荧光法卵巢的黄体细胞产生。孕酮主要作用于子宫内膜和等，而临床上应用最广泛的主要是免疫分析法。免子宫肌，它是受