抗体的系统性检测方法.pdf

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1、四川生理科学杂志2013；35(3)121抗体的系统性检测方法*杨靖孙卫兵。邝玉。△(1．湖北医药学院基础医学院微生物学教研室，湖北十堰442000；2．四川I大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室，四川成都610041；3．湖北省十堰市西苑医院呼吸内科，湖北十堰442000)ResearchadvanceofsystematicdetectionmethodofantibodyYangJing，SunWei-bing3，KuangYu△(1．Depamn∞tofMicrobiology，Hube

2、iUniversityofMedicine，HubeiShiyan442000；2DepartmentofMicrobiology，WestChinaofPreclinicalandForensicMedicine，SichuanUniversity，SichuanChengdu610041；3．Deparm~tofRespiratoryMedicine，XiyuanHospital，HubeiShiyan442O0O)摘要21世纪随着现代生物技术、信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入，以细

3、胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展，其应用已涉及医学、农业、食品、环境等众多领域。当前生物医药正在成为发展潜力无限的产业，而生物医药领域中发展最快的是抗体工程药物，在基础研究、蛋白纯化、环境与食品监测、疾病诊断预防及治疗和优生优育等方面均有不可替代的重要作用。虽然抗体的制备技术日趋完善，但用于诊断和治疗的抗体必须符合高纯度、高效价、高可用性的要求，对抗体的制备、分离和鉴定就显得尤为重要。本文简要阐述了抗体工程药物制备中对抗体成分的系统性检测方法，包括纯度检测、特异性检

4、测、亲和力检测、效价检测等，并对抗体这种特殊蛋白的常用定量检测方法进行了比较。关键词：抗体；鉴定；ELISA；Lowry法；BCA法特异性抗体制备和检测技术在医学临床实践、工农业生产下，在检测抗体纯度时，多采用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-及生物制品质量控制中意义重大，是疾病预防、诊断、治疗和疫PAGE)，如果目的蛋白条带未发现任何杂蛋白带则可认为其纯苗评价等领域的关键技术[。多克隆抗体来源广泛，制备容度8O～95。SDS-PAGE可鉴定其它杂蛋白的污染而不能易，作用全面，但其特异性不高、易发生

5、交叉反应等缺点也是显检出宿主污染的程度。在上样量大的情况下，如未发现任何而易见的。通过小鼠杂交瘤技术生产的单克隆抗体作为第二杂蛋白带则可认为的纯度大于95。为检查宿主Ig污染，代抗体制备技术使规模化制备高特异性、均质性抗体成为可可采用等电聚焦电泳(Isoelec-triefocusingelectrophoresis，能，单克隆抗体的制备技术包括嵌合抗体技术、噬菌体表面展IEF)[。此时，纯抗体表现为靠拢的3～7条带，这是由于纯抗示技术、核糖体表面展示技术等。由于单克隆抗体在生命科学体糖化的异质性所

6、致，而宿主的污染则表现为PH5～8处领域的巨大贡献，1984年CMilstein、GKohler和N．Jerne背景的增强或散在的模糊的多条带。获得了1984年的诺贝尔医学和生理学奖。目前单克隆抗体的研究已深入到医学和生物学的各个领域，成为一种必不可少的2特异性检测工具，具有极为重要的理论研究价值和实用价值]。在过去的抗体的特异性高，它的识别能力就强，经典的抗体特异性几十年里，对抗体的大量需求就要求我们对新的抗体纯化策略检测方法有有双向免疫扩散、免疫电泳等方法。免疫磁珠技术进行探索，学术界和产业上的

7、进步共同推动了抗体分离纯化技具有高灵敏度、高特异性、操作简单等诸多优势，在临床常规检术的发展。对制备的抗体进行系统的鉴定是一项尤为重要的测中具有潜在的应用价值，但是其试验成本相对较高，短时间工作，判断所得抗体质量优劣的主要指标包括对抗体的纯度、内还难以普及。胶体金免疫层析技术(Colloidal-goldimmuno—特异性、亲和力和效价的检测。chromatographyassay，GICA)Ⅲ4属于即时检测(Ppoint-of-care1纯度检测testing，POCT)领域中的成熟技术，是一种

8、将胶体金标记技术、免疫检测技术和层析分析技术等多种方法有机结合在一起的抗体纯化经常采用的方法是离子交换层析、亲和层析及高固相标记免疫检测技术，是诊断试剂盒中最关键的原材料，能效液相层析等，亲和层析又发展出包括硫酸铵一蛋白A亲和层快速、灵敏、简捷的实现指标的定性检测，正逐渐向定量检测发析法、辛酸一硫酸铵一蛋白A亲和层析法等新方法，但无论何种展，在感染性疾病、心血管疾病、风湿病、自身免疫疾病等的检纯化方法均不能绝对避免其它杂蛋白及宿主免疫球蛋白的污测、诊断中有广泛的应用，