抗丝集蛋白抗体及抗核周因子抗体在类风湿关节炎诊断中的意义.pdf

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1、中国药物与临床2015年1月第15卷第1期ChineseRemedies&Clinics，January2015，~o1．15，No．1·141··医学检验·抗丝集蛋白抗体及抗核周因子抗体在类风湿关节炎诊断中的意义张文军类风湿关节炎(RA)是最常见的风湿病之一，是以对称性1．2．2．1APF抗原制备：①清洁口腔，用海绵涂抹两颊黏膜；关节炎为主要临床表现的异质性、系统性疾病。我国RA患②将海绵置人10mlpH7．4O．01mol／LPBS中，挤压海绵，使病率为0．36％，患病总人数至少400万l1]。RA是慢性、进行颊

2、黏膜脱落，细胞溶人PBS中；③80o×g离心3min，弃上清；性、侵袭性疾病，如不给予患者适当治疗．病情逐渐发展加④加入l0rnl含0．5％Triton．XIO0的PBS，静置10min后，重，致残率高。因此早期治疗是关键。本文通过对163例患者800xg离心3min，弃上清；⑤细胞用10mlPBS洗涤，800xg抗丝集蛋白抗体(AFA)及抗核周因子抗体(APF)检测，发现离心3min，弃上清；⑥显微统下计数，调整细胞数至1000／10RA患者血清中AFA，APF具有很高的特异性。现报告如下。ml；⑦点片，干燥后～7

3、0℃保存。1资料与方法1．3．2APF间接免疫荧光法检测：①标本血清用PBS1：20和1．1一般资料：RA组：2001-2003年我院内科门诊及住院稀释后加在原片上，放室温1h。②用PBS洗涤3次，每次5RA患者163例，男性64例，年龄18～77岁；女99例，年龄min。③滴加1：40稀释后的FITC标记的抗人IgG抗体，室温23～69岁。非RA对照组共71例．其中系统性红斑狼疮(SLE)30min。④用PBS洗涤3次，每次5min。⑤缓冲甘油(50％甘34例，男性4例，女性30例，年龄16—55岁；强直性脊柱炎油

4、，50％PBS)封片，荧光显微镜(日本尼康)下观察结果。⑥结(As)17例，男性15例，女性2例，年龄13～36岁；系统性硬果判断：观察5个视野(约100个细胞)，核周均质圆形椭圆化症(SSC)20例，男性4例，女性16例，年龄20～6l岁。所有形荧光颗粒为阳性细胞，I>5个细胞为阳性。标本血清分装后一2O℃保存。1．4统计学处理1．2方法应用SPSS10．0软件进行统计检验，P<0．05为差异有1．2．1AFA检测：AFA抗原片基质(由德国欧蒙公司提供)为统计学意义。大鼠食管中段1／3的冰冻组织切片。2结果1．2．

5、2AFA间接免疫荧光法检测(德国欧蒙公司提供试剂)：163例RA患者中AFA单项阳性87例(53．4％)，APF单①待测血清用于磷酸盐缓冲液(PBS)．T1：10稀释后加25l性阳性90例(55．2％)。AFA+APF两项阳性82例(50．3％)。阳在加样板的每一反应区内，避免气泡，同时加入阳性阴性对性确诊率AFA，APF分别为94．3％，98．5％。经校正检验，差照血清。②将生物薄片载片盖在加样板的凹槽里，确保每一异有统计学意义(P<0．O1)。见表1。样品与生物薄片接触且样品间互不接触。反应开始，室温温表12组患

6、者中AFA、APF特异性及敏感性育30min。③先用PBS．T轻轻冲洗掉片上的反应液，再在PBST中浸泡，不必摇混，时间不少于1min。④在加样板上滴加羊抗人IgGFITC20l。⑤取出5s内，用吸水擦拭一下背面和边缘后立即盖在加样板的凹槽里．不要擦拭反应区间隙，避光室温温育30min。⑥用PBS．T轻轻冲洗掉片上的反应液，再在PBS—T中浸泡，不必摇混，时间不少于1min。⑦滴加甘油／PBS至盖玻片、封片。⑧荧光显微镜(日本尼康)下观察结果。⑨结果判断：阳性：荧光显微镜下可见角质层出现较强的亮绿色板层状，线状的均质

7、荧光。其他模式的荧光，包括角质层与其他上皮层(角质基底层，角质刺层)同时阳性荧光，均视为非特异性。阴性：角质层呈现暗红色无荧光为阴3讨论性。RA是一种自身免疫病，致畸陛、致残率很高，防治的重点1．2．2APF检测在于早期诊断、早期治疗，如何提高诊断率一直是临床医生DOI：10．11655／zgywylc2015．01．070迫切需求的。RA的免疫与特点之一是存在RF，但大量临床作者单位：063600河北省乐亭县医院内四科·142·史冒药物与临床2015年1月第15卷第1期ChineseRemedies＆Clinics

8、,Januarc2015，Vo1．15．No．1资料证明RF不特异，这就需要检测对RA特异性较强的有之一。关自身抗体[2-4]。本文通过对163例RA患者血清检测AFA、目前，RA仍缺乏实验室特异性诊断指标，临床医生若能APF，结果表明：AFA的敏感性为53．4％，特异性为94．3％，阳根据患者I临床症状及x线表现，再进行AFA、APF等自身抗