抗人白细胞介素15中和抗体识别抗原表位的噬菌体肽库筛选与鉴定.pdf

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1、技术通讯v·l82LETTrERSINBIOTECHNOLOGYVol．·26ONl。o．·2zMar．,⋯ZUI3一doi：10．3969~．issn．1009—0002．2015．02．006研究报告抗人白细胞介素15中和抗体识别抗原表位的噬菌体肽库筛选与鉴定高源，郝强，王舒宁，张伟，薛晓畅1．肿瘤生物学国家重点实验室；2．第四军医大学药学系生物制药学教研室；陕西西安710032[摘要]目的：用噬菌体呈现随机七肽库筛选能与抗人白细胞介素15(hIL一15)中和抗体特异性结合的模拟抗原表位肽，并

2、初步鉴定其免疫原性。方法：以抗hlL一15中和抗体为靶分子，用生物淘洗法从噬菌体呈现线性七肽库中筛选与之结合的噬菌体克隆，用噬菌体ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆；化学合成筛选得到的多肽，并与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联免疫BALB／c小鼠，检测其免疫原性。结果：经过3轮体外筛选后随机挑取50个阳性噬菌体克隆，ELISA检测结果显示其中15个克隆与抗hlL一15抗体有较强的结合能力，DNA测序结果得到的结构相似群为MTPFWQK、MSPFNQK、MIPYWQK和MIPFHQK；竞争性

3、ELISA结果显示4个序列均能-SIL一15竞争性地结合抗IL一15单抗；小鼠免疫实验结果显示4组多肽均能诱导IL一15特异性免疫反应。结论：筛选得到能与抗hIL一15中和抗体特异性结合，且具有免疫原性的模拟抗原7肽序列，为进一步开发hIL一15相关的多肽疫苗提供了依据。[关键词]噬菌体随机肽库；白细胞介素15；单克隆抗体；表位；免疫[中图分类号]R392．1[文献标识码]A[文章编号]1009—0oo2(2O15)O2—0182—04ScreeningandIdentificationofAnt

4、igenEpitopeofhlL__15Recog-nizedbyMonoclonalAntibodywith7rMphageDisplayPeptideLibraryGAOYuan，HAOQiang,WANGShu—Ning,ZHANGWei，XUEXiao—ChangDepartmentofBiopharmaceutics，SchoolofPharmacy，theFourthMilitaryMedicalUniversity，Xi'an710032，ChinaCorrespondingauth

5、or．E—mail：xuezch@fmmu．edu．cn[Abstract]Objective：Toscreenoutshortpeptideantigenepitopescapableofbindingwithantihumaninter-lukin15(hIL一15)monoclonalantibodyfrom7TMphagedisplaypeptidelibrary．Methods：Usinganti-hIL-15anti—bodyasthetargetprotein，peptideswhi

6、chcouldbindwithanti—hIL一15antibodywereselectedfrom7rMphagedis—playpeptidelibrarybybiopaningandidentifiedbysandwichELISAandcompetitiveELISA．TheselectedpeptidewasconjugatedtokeyholelimpethemocyaninandtheimmunogenicityofthepeptidevaccineswasexaminedinBAL

7、B／cmice．Results：15of50phagecloneswereidentifiedaspositivecloneswhichcanbindtoanti—hlL一15antibodyafterscreeningandELISA．TheaminoacidsequencesofthepositiveclonesareMTPFWQK，MSPFNQK，MIPYWQK，andMIPFHQK．Serafromthevaccinatedmicedemonstratedhigh—titerspecifi

8、cantibodiestothepep—tideconjugates．Conclusion：Theselectedpeptideepitopescouldbindspecificallytotheanti—hIL一15antibodyandinducedanti—IL一15specificimmuneresponse．TheworkprovidedthepotentialfordevelopingshortpeptideIL一15vascines．[Keywords]phagedi